耐药株前培养团聚问题，优化胰酶+促贴壁试剂参考-细工生物20250328

建议参考类：乳腺，肝，胰岛胰腺，免疫悬浮，胶质-神经，内膜，上皮，内皮，SV40-大T抗原，

特点：团聚

免疫类团聚参考：换液不弃液，解决团聚

贴壁大部分所需自分泌竞相因子特点细胞，LNCAP、BV-2、mcf-7、ins-1，hep3b、thp-1。

验证很简单，上清回输后细胞增殖比全新完全培养基增殖快，细胞状态漂亮，先做预实验，拿到这个结果，后面可长期备份上清，做为救助细胞最好条件。

细工优化胰酶+促贴壁试剂应用后团聚细节讨论。

促贴壁试剂辅助后，平时7-8个小时才贴壁细胞区别，辅助试剂一小时就贴壁（也是我司救助细胞基本原理）增殖，代谢明显加快，就别按传统观念，要考虑细胞汇合80-90%就要传代，老习惯后，细工试剂种子库级别的，细胞锚着后就可是克隆生长，代谢等，容易细胞长的很满，并团聚厉害后，老幼状态不一，细胞液更容易变黄，团聚太厉害的，影响后面实验（转染前，冻存前），摸出该细胞增殖特点调整让细胞舒服锚着，增殖条件（自动化培养开发该项非常重要），再结合膜无损胰酶，消化成单个，传代，保证细胞质量一致性，对后面维持培养，超量培养前期种子扩增非常重要。

团聚厉害组参考建议：可做超长时间消化，几个小时，甚至过夜，如能验证顺利，原代离体后组织也可做为参考条件理由，团聚也可理解成培养成组织块，该项要能深入研究，二维-三维培养那个条件增殖，那个条件三维，可做充足技术储备。

该条件团聚，与生长较慢条件团聚，差别很大，粗略概述几个因素不同：PH变化，耗材，代谢，试剂营养水平（种子库要求）平时试剂筛选，习惯特点，等很多因因素都要考虑进去，正常生长条件团聚，说明试剂，耗材，技术等都还比较合适，通过细胞汇合度，传代，上清利用等条件，把细胞调整到，细胞质量一致性是重点。

扣主题：建系，蛋白质晶体（真核细胞），耐药株单克隆（超量培养，维持培养），自动化培养等所需冗余试剂，欢迎同学通过解决问题预实验验证提前技术储备，试剂订购与否都没关系。

自动化培养相关试剂，技术开发，相关设备厂家，应用厂家，提前细胞培养技术人员人才储备。

关键词：耐药株筛选、精准SOP,配套自动化培养，

蛋白质晶体：简易单克隆方法，超量培养，维持培养，纯化蛋白，结晶

注：省去化学，电转染相关步骤目的是自动化培养相关开发，避开能力财力限制，让自动化运行设备替代人力最繁重，易出错，机械24小时运行工作明显优势。

纯国内试剂技术建系 ：科研层面整体贯穿、PDX、类器官，人造肉、自动化应用。一定是先有细胞系，再有自动化培养应用。

讨论：

需几天长满，团聚图片，如何消化，细胞汇合多少开始传代，如何保证细胞质量一致性，后面实验都较关键。

控制增值快，有很多方法，减血清，上清回输，传代时细胞数量控制，汇合度条件传代等

增殖太快，也可不用促贴壁啊。这个试剂特点做过预实验了解下就行，也可做上述，该条件培养特性条件摸索。