黑胶虫污染统计，如有时间可将发生污染的血清牌子、型号、批号等详细信息发我，统计结果大家共享（因跟操作步骤也有关，统计准确结果较难）我司只先做相关统计，有过污染的客户请用酒精消毒所有相关器物，包括细胞培养箱。
用进口血清的实验室注意，如自愿加入我公司细胞统计的可将细胞名录中文英文（最好有图片）列表发我，如直接从ATCC进口的请注明，我司统计后的结果会和大家共享统计结果。
20230926经12年相关案例统计，细工参考建议： 过关进口耗材试剂，很少有黑点，即便是保种级别试剂，操作生硬粗暴也会有黑点发生，可参考我们广谱杀菌相关方法与操作。更多数据还需更多案例疑问与解决情况，疫情后国产试剂耗材众多，细工建议用RAW264.7验证参考有些意义。其他重点室特殊细胞培养，特殊手法需求及问题都可讨论，我司优势结合难养类肝、乳腺类、免疫悬浮类，腺类、上皮类等难点多重考虑给出建议参考。海归老师提问问题非常重视，跟接近国外一流梯队技术水平，老师多多提携指正。我们不怕问题，更多问题才会出现更优产品。
20240923
问题关于黑点
细工建议参考，用对试剂耗材（种子库级别细胞不建议用便宜试剂，保种上百只种子细胞，也用不了多少钱的）胰酶轻柔处理（避免枪直接吹打细胞损伤也是较重要指标参数），几代或十几代后，黑点会全部消失。这个建议也只是救助办法参考建议，经历过黑点的细胞，建议重新保种国内正规库来源细胞。
结合系生长慢参考
细工建议参考 给出方案是进口瓶培养（康宁，nunc,德国产细工全部现货） ，种子库级别试剂（三千以上胎牛，我司验证五年以上南美）我司培养基或者是GIBCO培养基，放足培养基（多些也没关系）几天不动，看下恢复情况，结合我司胰酶（无损消化）传几代应该能找回较好状态，该方法也适合细胞养几代后就爬爬这种情况（上述方法也适合细胞养传代后细胞就爬爬这种情况，该因素原因很多，具体情况集体分析）该方法也建议原代首代培养（类器官）就是普通培养基加胎牛（因子贵，lag phase长、无血清不稳点）全部能替代，细胞够多或稳定后在上无血清可做参考。类器官配套耗材U型低（不加辅助条件成球）及磁珠配套磁力成球可来信告知索取资料及技术讨论。邮件联系
上述思路解决要顺利，来信告知，目前统计进口试剂耗材成功案例，有细胞生长慢，黑点案例都误认为是支原体，合作实验室比较熟悉培养体系，应用后，任何问题都没有，就是复苏初期老师比较心急，没按正常传代后，皿居多，三天以上后，pH变化较快，影响了后面生长。如验证，到任何问题难点都可来信讨论。如有理想趋势生长，胰酶建议用0.05或者我司胰酶（上皮类成片解决要柔和，常规0.25浓度容易消化成细胞泥，膜损伤厉害，对细胞损伤很大，影响救助）
我们会统计更多难点应用有
成瘤不理想细胞株
耐药株复苏救助
细胞养几代后就爬爬这种情况
该理由来自类器官培养统计，及下面各类难养株常年统计，下面内容有需要的可来信告知。我发您，要有针对的痛点难点，我们会补充更多资料。
救助细胞系建议来源国内正规库，公司来源差很多。如照顾我司生意长期订购试剂，我们可送国内库同类细胞株做奖励，我司今年试剂所有原料都是临床原料级别。能到种子库级别。
相关救助方案我们会一直优化没更多好消息发您，还想问题下干细胞培养老师，您用的培养体系二氧化碳是否有控制，是否是2%，还是5%二氧化碳。如果用EDTA消化，建议用我们优化胰酶可能细胞会更好（我们胰酶对细胞膜无损，可发试用）长期干细胞培养治疗相关，可长期讨论更多应用。我们后面也做重点科研讨论，
20231103
常见问题关于黑点
细工建议参考，用对试剂耗材（种子库级别细胞不建议用便宜试剂，保种上百只种子细胞，也用不了多少钱的）胰酶轻柔处理（避免枪直接吹打细胞损伤也是较重要指标参数），几代或十几代后，黑点会全部消失。这个建议也只是救助办法参考建议，经历过黑点的细胞，建议重新保种国内正规库来源细胞。
问题细胞系生长慢-原代生长慢-细胞养几代后就爬爬这种情况
细工建议参考 给出方案是进口瓶培养（康宁，nunc,德国产细工全部现货） ，种子库级别试剂（三千以上胎牛，我司验证五年以上南美）我司培养基或者是GIBCO培养基，放足培养基（多些也没关系）几天不动，看下恢复情况，结合我司胰酶（无损消化）传几代应该能找回较好状态，该方法也适合细胞养几代后就爬爬这种情况（上述方法也适合细胞养传代后细胞就爬爬这种情况，该因素原因很多，具体情况集体分析）该方法也建议原代首代培养（类器官）就是普通培养基加胎牛（因子贵，lag phase长、无血清不稳点）全部能替代，细胞够多或稳定后在上无血清可做参考。类器官配套耗材U型低（不加辅助条件成球）及磁珠配套磁力成球可来信告知索取资料及技术讨论。邮件联系
气泡培养伴随细节处：预判自动化培养关键点
吸液按到底，很多会忽略。大部分问题可解决，
上述问题细工统计解决问题比较顺利，大部分也没有常规判断的支原体等问题。23年解决几个案例非常成功。
成瘤不稳定组参考，首发少数技术老师参考
瓶，慢养慢传代慢生长，无损胰酶，少二氧化碳，减缓生长，减缓分化，理由：来自成干成球培养，难养细胞株痛点统计规律相似特点。分出一批评测，操作更简单，给成瘤不稳定组，提供一组备份条件，从成干特点上看，优势挺大的，也给出一套备份技术储备。
提醒：这类问题如有，培养部分上述注意外，种子来源非常重要，如是长期课题，种子建议国内正规库重新订购，并把试剂耗材部分尽量于正规库一致，一组，上述瓶并减二氧化碳一组，成干厌氧培养可查减缓细胞分化（理由一组救治培养,千万别图块）
细胞接种成瘤不稳定痛点咨询，来自北京一些实验室成瘤问题普遍降低，我们给出些参考，应用还不多，还在统计中，慢培养是一个因素，还有一个是缺氧培养，查了些资料，昆明海拔一千以上，能否从您那得到些细胞系培养与海拔较低地区，北京，上海，广州地区常规培养是否有生长慢特性，特点，后面这个验证顺利，还考虑总结合作更高海拔培养特点，宁夏西藏，高海拔总结统计还没开始。
20241119
自动化培养冗余试剂开发案例介绍-黑点、生长慢解决思路方法参考
问：
想请教一下各位老师，图里的是293t细胞，红框标识的地方细胞内有小黑点，而且会动，请问这可能是什么，有什么处理方案吗；当前尝试使用左氧当作支原体处理，目前看来无效？
就是怀疑细胞里面的黑点是某种胞内微生物污染
准备检测一下
答：
黑点讨论：用瓶用皿，生长时间多久，胰酶浓度可低些，提高血清浓度，换成瓶进口的，恢复下，养几天试试，要是生长时间长，上述很管用，血清厂家货号，培养基效期列出下，要是时间太长，补谷氨酰胺，或换成叫新批次，按上述做下，如有条件换成大牌子进口的，养几代会有改观。如有效果来信告知。我们统计黑点，生长慢问题
黑点发生，培养液不新鲜，血清营养含量不够，生长慢后，皿容易PH变化大，导致越来PH变化越大，过酸或过碱，瓶能改善，并能恢复，参考。我觉得检测意义不大，上述要列出来，问题就能很快排除，培养基都差不多，后面要长养细胞，叫新鲜要对厂家说出来，或者自己有补救办法。说的不对处请海涵。
验证后，再出现黑点问题，能很快排除，目前几个组按上述验证，用户还比较满意。
低浓度胰酶，0.05是个好习惯，消化时间虽然长些，膜无损更重要，正规库几个老技术都推荐，也不反驳同学用，0.25我们做自动化培养冗余试剂开发，胰酶浓度很关键。
0.25消化后的细胞，传代后会先恢复细胞膜在生长，细胞工厂大面积消化，我们有统计，还有就是成团成片类特性细胞，0.25容易把外面消化成泥，里面也没消化透 ，并伴随细胞老幼状态，上皮类团聚尤甚，293就是上皮类案例，老幼情况出现，细胞状态不一，难做后面实验，参考
避免建议，小克隆形成后，就用低浓度胰酶，消化成单个传代，大面积在消化，老幼问题用以出现，案例细胞，mdck
注：生长慢同理处理，疑问处可讨论痛点。经上述问题长期统计，黑点影响因素参考：培养基新鲜度（谷氨酰胺降解没发挥作用），血清营养程度（影响增殖生长），胰酶损伤程度（影响细胞膜完整）。通过问题验证试剂筛选推荐。上述针对细胞系含血清方案。原代无血清，建议含血清先摸出最优生长条件（2020年类器官相关统计）原代较好条件，上述处理步骤理解应用后，4-7天就会传代长满，培养时间太长，是培养条件不合适，所以建议含血清先行，大量细胞培养后，在上无血清相对容易。细节处告知详情讨论。建系目的标注清楚，我们推荐配套试剂，方法。
总结：类器官、人造肉、自动化培养、建系、微流控制培养等应用，长久看，各种培养中问题都要解决或者有突破，细工生物在这方面，根据自己能力财力，推荐含血清方案为主(容易实现，也是无血清培养条件验证大量细胞拿到验证前提，即便是临床研究应用目的，细胞量也是摸无血清培养条件前提)目前国内已有公司推出把类器官培养100培养工作一天完成成瘤成球，延展讨论以下体系培养中问题统计(涉及统计内容较多，有需要可留邮箱）。