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基质金属蛋白酶13活性实验

作者:武汉云克隆诊断试剂研究所 2020-10-19T15:42 (访问量:2567)

基质金属蛋白酶(Matrix Metalloproteinase)是一组具有多种共同生化性质的可以降解细胞外基质的酶,它们参与正常生命过程中结缔组织的再造。基质金属蛋白酶的降解作用在中性pH条件进行,需要有内在的Zn2+离子和外在的Ca2+离子存在;且酶活能被螯合剂和金属蛋白酶的组织抑制因子(Tissue Inhinbitor of Metalloproteinase,TIMP)所抑制。 基质金属蛋白酶13(MMP13)是基质金属蛋白酶家族的成员,研究表明MMP13参与与骨关节炎相关的聚集蛋白聚糖降解,骨关节炎软骨移植物中II型胶原蛋白的裂解,以及肿瘤的进展和转移。另外,MMP13还可以切割I,III,IV,IX,X和XIV型胶原蛋白和纤连蛋白。MMP13在细胞外基质降解和细胞-基质相互作用的调节中起关键作用。 我们使用明胶酶谱法检测了MMP13的活性。具体步骤如下: 1.制备不同浓度的MMP13,1000ng,500ng,250ng,125ng; 2.向不同浓度的MMP13中加入用SDS上样缓冲液; 3.在非还原条件下,将不同浓度的MMP13和阴性对照(热变性的MMP13)上样电泳,使用含明胶(1mg / mL)的十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶(SDS-PAGE,10%凝胶); 4.复性,孵育,CCB染色。 结果:活性MMP13会水解凝胶中的明胶,由凝胶上的白色条带指示。 重组MMP13的明胶水解如图1所示。

实验所使用的MMP13活性蛋白:APA099Hu01,Cloud-Clone。

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