Annexin V-PE/7-AAD 凋亡流式检测试剂盒


产品简介：
细胞凋亡早期改变发生在细胞膜表面，这些细胞膜表面的改变之一是磷脂酰丝氨酸（PS）从细胞膜内转移到细胞膜外，使 PS 暴露在细胞膜外表面。PS 是一种带负电荷的磷脂，正常主要存在于细胞膜的内面，在细胞发生凋亡时细胞膜上的这种磷脂分布的不对称性被破坏而使PS 暴露在细胞膜外。Annexin V 具有易于结合到磷脂类如 PS 的特性，对 PS 有高度的亲和性。因此，该蛋白可充当一敏感的探针检测暴露在细胞膜表面的 PS。PS 转移到细胞膜外不是凋亡所独特的，也可发生在细胞坏死中。两种细胞死亡方式间的差别是在凋亡的初始阶段细胞膜是完好的，而细胞坏死在其早期阶段细胞膜的完整性就破坏了。因此，可以采用 AnnexinV 与7-AAD 双染的方法，通过流式检测细胞早期凋亡。

操作步骤:

标记的 Annexin V 可结合流式细胞仪用于检测细胞外膜上的磷酯酰丝氨酸
1.用去离子水按 1:4 稀释结合缓冲液（4ml 结合缓冲液+12ml 去离子水）；
2.用 4℃预冷的 PBS 洗细胞两次，用 250ul 结合缓冲液重新悬浮细胞，调节其浓度为 1× 106/ml；
3.取 100μl 的细胞悬液于 5ml 流式管中，加入 5μl Annexin V/PE 和 10μl 7AAD 溶液；
4.混匀后于室温避光孵育 15 分钟；
5.在反应管中加 400μl PBS，流式细胞仪（FACS）分析

（注：消化细胞时不能用含 EDTA 的胰酶）

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