产品内容： 
提取液：液体 50mL×1 瓶，-20℃保存； 
试剂一：液体 5mL×1 瓶，-20℃保存； 
试剂二：液体 0.6mL×1 支，-20℃保存； 
试剂三：液体 40mL×1 瓶，4℃保存； 
试剂四：粉剂×2 支，4℃保存，临用前加入 1mL 双蒸水，用不完的试剂仍 4℃保存； 
试剂五：粉剂×4 支，-20℃保存，临用前加入 500μL 双蒸水，用不完的试剂仍-20℃保存； 试剂六：粉剂×1 支，-20℃保存，临用前加入 1.5mL 双蒸水，用不完的试剂仍-20℃保存；
产品说明： 
CS（EC 2.3.3.1）广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞的线粒体基质中，是三羧酸循环 第一个限速酶，是三羧酸循环主要调控位点之一。 CS 催化乙酰 CoA 和草酰乙酸产生柠檬酰辅酶 A，进一步水解产生柠檬酸；该反应促使无色的 DTNB 转变成黄色的 TNB，在 412nm 处有特征吸光值。 
试验中所需的仪器和试剂： 可见分光光度计/酶标仪、低温离心机、水浴锅、可调节移液器、微量比色皿/96 孔板和蒸馏水。
操作步骤： 
一、 样本前处理 组织、细菌或细胞中胞浆蛋白与线粒体蛋白的分离： 
1 称取约 0.1g 组织或收集 500 万细胞，加入 1mL 提取液和 10μL 试剂二，用冰浴匀浆器或研 钵匀浆。 
2 将匀浆液 600g，4℃离心 5min。 
3 将上清液移至另一离心管中，11000g，4℃离心 10min。 
4 上清液即胞浆提取物，可用于测定从线粒体泄漏的 CS。 
5 在沉淀中加入 200μL 试剂一和 2μL 试剂二，反复吹打充分混匀，用于 CS 测定。 
6 柠檬酸合酶酶活即沉淀和上清液中的酶活之和。 
二、测定步骤： 
1、分光光度计预热 30min 以上，调节波长至 412nm，蒸馏水调零。 
2、试剂三置于 25℃（一般物种）或者 37℃（哺乳动物）水浴中预热 10min 左右（保证无沉淀）。 
3、操作表： 
在微量比色皿/96 孔板中分别加入
试剂名称（μL）
测定管
对照管
试剂三
172
186
试剂四
7
7
试剂五
7
 
样本
7
7
试剂六
7
 
将上述试剂按顺序加入 1 mL 玻璃比色皿中，加试剂六的同时开始计时，记录 412nm 波长下 10 秒时的初始吸光度 A1，之后迅速将比色皿连同反应液一起放入 37℃（哺乳动物）或 25℃（其它物 种）水浴中准确反应 2 分钟；迅速取出比色皿并擦干，412 nm 下记录 2 分 10 秒时的吸光度 A2，上 清液、沉淀的测定管、对照管均需测量(每个样本需测 4 管)。 计算上清液的测定管ΔA1=A2-A1，上清液对照管的ΔA1’=A2-A1，沉淀的测定管ΔA2=A2-A1， 沉淀的对照管ΔA2’=A2-A1，计算ΔA 上清=ΔA1-ΔA1’，计算ΔA 沉淀=ΔA2-ΔA2’。
 
注意事项： 
1、测定过程中样本和所有试剂在冰上放置，以免变性和失活。 
2、比色皿中反应液的温度必须保持 37℃或 25℃，取小烧杯一只装入一定量的 37℃或 25℃蒸馏 水，将此烧杯放入 37℃或 25℃水浴锅中。在反应过程中把比色皿连同反应液放在此烧杯中。 
3、最好两个人同时做此实验，一个人比色，一个人计时，以保证实验结果的准确性。 
三、CS 活性计算： 
1、组织中 CS 活力的计算: 
（1）按样本蛋白浓度计算： 
单位的定义：37℃或 25℃下每 mg 组织蛋白在反应体系中每分钟催化产生 1 nmol TNB 定义 为一个酶活力单位。 
CS 上清（U/mg prot）=ΔA 上清÷ε÷d×V 反总÷（Cpr 上清×V 样本）÷T=1050×ΔA 上清÷Cpr 上清 CS 沉淀（U/mg prot）=ΔA 沉淀÷ε÷d×V 反总÷（Cpr 沉淀×V 样本）÷T =1050×ΔA 沉淀÷Cpr 沉淀 CS（U/mg prot）=CS 上清+CS 沉淀=1050×ΔA 上清÷Cpr 上清+1050×ΔA 沉淀÷Cpr 沉淀。
（2）按样本鲜重计算： 
单位的定义：37℃或 25℃下每 g 组织在反应体系中每分钟催化产生 1 nmol TNB 定义为一 个酶活力单位。 CS 上清（U/g 鲜重）=ΔA 上清÷ε÷d×V 反总÷（W×V 样本÷V 提取）÷T =1050×ΔA 上清÷W  CS 沉淀（U/g 鲜重）=ΔA 沉淀÷ε÷d×V 反总÷（W×V 样本÷V 沉淀）÷T =212×ΔA 沉淀÷W CS（U/g 鲜重）=CS 上清+CS 沉淀=1050×ΔA 上清÷W+212×ΔA 上清÷W。 
2、细菌或培养细胞中 CS 活力的计算: 
（1）按样本蛋白浓度计算： 
单位的定义：37℃或 25℃下每 mg 蛋白在反应体系中每分钟催化产生 1 nmol TNB 定义为一 个酶活力单位。 CS 上清（U/mg prot）=ΔA 上清÷ε÷d×V 反总÷（Cpr 上清×V 样本）÷T=1050×ΔA 上清÷Cpr 上清 CS 沉淀（U/mg prot）=ΔA 沉淀÷ε÷d×V 反总÷（Cpr 沉淀×V 样本）÷T=1050×ΔA 沉淀÷Cpr 沉淀 CS（U/mg prot）=CS 上清+CS 沉淀=1050×ΔA 上清÷Cpr 上清+1050×ΔA 沉淀÷Cpr 沉淀。
（2）按细菌或细胞密度计算： 
单位的定义：37℃或 25℃下每 1 万个细菌或细胞在反应体系中每分钟催化产生 1 nmol 5TNB 定 义为一个酶活力单位。 CS 上清（U/10 4 cell）=ΔA 上清÷ε÷d×V 反总÷（500×V 样本÷V 提取）÷T=2.1×ΔA 上清 CS 沉淀（U/10 4 cell）=ΔA 沉淀÷ε÷d×V 反总÷（500×V 样本÷V 沉淀）÷T =0.4242×ΔA 沉淀 CS（U/10 4 cell）=CS 上清+CS 沉淀=2.1×ΔA 上清+0.4242×ΔA 沉淀。
 ε：TNB 的消光系数，13.6×10 -3mL/(nmol·cm)；V 反总：反应体系总体积，1mL；d：比色 皿光径，1cm；V 样本：加入的样本体积，0.035mL；V 提取：提取液体积，1mL；V 沉淀：溶 解沉淀的总体积，0.202mL；T：反应时间，2min；Cpr 上清：上清液的蛋白浓度，mg/mL；Cpr 沉淀：沉淀溶解后的蛋白浓度, mg/mL；W：样本鲜重，g。
 
注意事项
1、测定过程中样本和所有试剂在冰上放置，以免变性和失活。 
2、比色皿中反应液的温度必须保持 37℃或 25℃，取小烧杯一只装入一定量的 37℃或 25℃蒸馏水， 将此烧杯放入 37℃或 25℃水浴锅中。在反应过程中把比色皿连同反应液放在此烧杯中。 
3、最好两个人同时做此实验，一个人比色，一个人计时，以保证实验结果的准确性。 
4、用 96 孔板测定时，根据测定管数量配制测定管工作液（试剂三、四、五、六）和对照管工作液 （试剂三、四），因通过单位时间内吸光值变化计算酶活，不推荐同时测多个样本。 5、用 96 孔板做实验时，计算公式中的比色皿光径变为 0.5cm。
 
相关文献：
《Trimetazidine restores the positive adaptation to exercise training by mitigating statin‐induced skeletal muscle injury》 作者:Ming Song , Fang‐fang Chen , Yi‐hui Li,  Lei Zhang , Feng Wang,  Ran‐ran Qin  ,Zhi‐hao Wang , Ming Zhong , Meng‐xiong Tang , Wei Zhang , Lu Han 期刊:Journal of Cachexia, Sarcopenia and Muscle 影响因子:10.754 PMID:29152896
《Cell death induced by α-terthienyl via reactive oxygen species-mediated mitochondrial dysfunction and oxidative stress in the midgut of Aedes aegypti larvae》 作者:JieZhangaShakilAhmadaLan-YingWangaQianHanbJian-ChunZhangaYan-PingLuo 期刊:Free Radical Biology and Medicine 影响因子:5.657 PMID:31022448