1.SYBR Green I荧光定量PCR简介和原理

SYBR Green I与dsDNA 结合荧光信号可增强800—1000倍。在PCR反应体系中，加入过量SYBR Green I荧光染料，SYBR荧光染料特异性地掺入DNA双链后，荧光信号增强，而不掺入链中的SYBR Green I染料分子荧光不变，从而保证荧光信号的增加与PCR产物的增加完全同步。荧光可以在退火阶段或者延伸阶段测定。

2.使用方法：

我们提供的为20×的浓缩液，使用时可稀释20—100倍，使反应的终浓度为1×到0.2×之间。例如配50ul总体积的PCR反应液，应加20×的SYBR Green I染料0.5ul—2.5ul。

3.使用浓度对荧光PCR结果的影响

SYBR Green I荧光定量PCR的试验成功有很多因素，但是SYBR Green I的使用浓度是非常关键的因素 ，如果SYBR Green I的浓度过低会使荧光信号的变化降低。这就意味着低拷贝的样品可能无法检出；而在高浓度时，将会抑制PCR反应。降低PCR反应效率。所以一般在使用SYBR Green I时应根据实际情况优化使用浓度。

4.镁离子浓度的影响

提高镁离子浓度可以降低SYBR Green I对PCR反应的抑制作用。我们建议在用SYBR Green I进行荧光PCR反应时，镁离子浓度要比无SYBR Green I 的普通 PCR 反应要高出 0.5 至3mM。