谷胱甘肽S-转移酶测定试剂盒 UV板 微量法-酶-试剂-生物在线
谷胱甘肽S-转移酶测定试剂盒 UV板 微量法

谷胱甘肽S-转移酶测定试剂盒 UV板 微量法

商家询价

产品名称: 谷胱甘肽S-转移酶测定试剂盒 UV板 微量法

英文名称: Micro Glutathione S-transferase (GST)Assay Kit

产品编号: BC0355

产品价格: 0

产品产地: 北京市通州区马驹桥联东U谷85A三

品牌商标: Solarbio

更新时间: 2024-05-06T09:37:28

使用范围: null

北京索莱宝科技有限公司
  • 联系人 : 索莱宝-龚思雨
  • 地址 : 北京市通州区中关村科技园区通州园金桥科技产业基地景盛南四街15号85A三层
  • 邮编 : 101102
  • 所在区域 : 北京
  • 电话 : 178****1073
  • 传真 :
  • 邮箱 : 3193328036@qq.com

产品内容: 

试剂一:液体 100mL×1 瓶,4℃保存。

试剂二:液体 22mL×1 瓶,4℃保存。

试剂三:粉剂×1 瓶,4℃保存。临用前加 2 mL 蒸馏水溶解。

 

产品说明: 

GST 是一种具有多种生理功能的蛋白质家族,主要存在于细胞质内。GST 是体内解毒酶系统的 重要组成部分,主要催化各种化学物质及其代谢产物与 GSH 的巯基共价结合,使亲电化合物变为 亲水物质,易于从胆汁或尿液中排泄,达到将体内各种潜在或具备毒性的物质降解并排出体外的目 的。因此,GST 在保护细胞免受亲电子化合物的损伤中发挥着重要的生物学功能。此外,因为 GST 具有 GSH-Px 活性,亦称为 non-Se GSH-Px,具有修复氧化破坏的大分子如 DNA、蛋白质等的功能。 注意,GST 催化的反应减少 GSH 含量,但是不增加 GSSG 含量。 GST 催化 GSH 与 CDNB 结合,其结合产物的光吸收峰波长为 340nm;通过测定 340nm 波长处 吸光度上升速率,即可计算出 GST 活性。

自备仪器和用品: 低温离心机、水浴锅、可调节移液器、紫外-可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96 孔 UV 板和蒸馏水。

操作步骤: 

一、粗酶液提取:

1. 组织:按照组织质量(g):试剂一体积(mL)为 1:5~10 的比例(建议称取约 0.1g 组织,加入 1mL 试剂一)进行冰浴匀浆。8000g,4℃离心 10min,取上清置冰上待测。

2. 细菌、真菌:按照细胞数量(10 4个):试剂一体积(mL)为 500~1000:1 的比例(建议 500 万 细胞加入 1mL 试剂一),冰浴超声波破碎细胞(功率 300w,超声 3 秒,间隔 7 秒,总时间 3min); 然后 8000g,4℃,离心 10min,取上清置于冰上待测。

3. 血清等液体:直接测定。

二、测定:

1. 分光光度计/酶标仪预热 30 min 以上,调节波长到 340 nm,用蒸馏水调零。

2. 试剂二放在 25℃(一般物种)或者 37℃(哺乳动物)保温。

3. 空白管:取微量石英比色皿,加入 20μL 试剂一,180μL 试剂二和 20μL 试剂三,迅速混匀后于 340nm 测定 10 s 吸光度记 A1,37℃水浴 5min 后,快速取出测定吸光度记 A2。 4. 测定管:取微量石英比色皿,加入 20μL 上清液,180μL 试剂二和 20μL 试剂三,迅速混匀后于 340nm 测定 10 s 吸光度记 A3,37℃水浴 5min 后,快速取出测定吸光度记 A4。

三、GST 活性计算: 

a.使用微量石英比色皿测定的计算公式如下

1)按蛋白浓度计算

 活性单位定义:在 25℃或者 37℃中,每毫克蛋白每分钟催化 1μmol CDNB 与 GSH 结合为一个酶活 性单位。

GST(U/mg prot)=[(A4-A3)-(A2-A1)]÷(ε×d)×10 6×V 反总÷(Cpr×V 样)÷T =0.23×[(A4-A3)-(A2-A1)] ÷Cpr

2)按样本鲜重计算

活性单位定义:在 25℃或者 37℃中,每克样品每分钟催化 1μmol CDNB 与 GSH 结合为一个酶活性 单位。

GST(U/g 鲜重)=[(A4-A3)-(A2-A1)]÷(ε×d)×10 6×V 反总÷(V 样÷V 样总×W)÷T =0.23×[(A4-A3)-(A2-A1)] ÷W

3)按细胞数量计算

活性单位定义:在 25℃或者 37℃中,每 10 4个细胞每分钟催化 1μmol CDNB 与 GSH 结合为一个酶 活单位。

GST(U/10 4 cell)=[(A4-A3)-(A2-A1)]÷ε÷d×10 6×V 反总÷(500×V 样÷V 样总)÷T =0.23×[(A4-A3)-(A2-A1)] ÷500

4)按液体体积计算

活性单位定义:在 25℃或者 37℃中,每毫升液体每分钟催化 1μmol CDNB 与 GSH 结合为一个酶活 单位。

GST(U/mL)=[(A4-A3)-(A2-A1)]÷ε÷d×10 6×V 反总÷V 样÷T =0.23×[(A4-A3)-(A2-A1)] ε:产物摩尔消光系数,9.6×10 3 L/mol /cm;d:比色皿光径,1cm;10 6:1mol=1×10 6μmol;V 反总:反应体系总体积,220μL=2.2×10 -4 L;Cpr:上清液蛋白质浓度(mg/mL),需要另外测定,建 议选用本公司生产的 BCA 蛋白质浓度测定试剂盒;W :样品质量,g;V 样:加入反应体系中上清 液体积,20μL=0.02 mL;V 样总:试剂一体积,1 mL;T:反应时间(min),5min;500:细胞数量, 500 万。

 

b.使用 96 孔板测定的计算公式如下

1)按蛋白浓度计算

活性单位定义:在 25℃或者 37℃中,每毫克蛋白每分钟催化 1μmol CDNB 与 GSH 结合为一个酶活 性单位。

GST(U/mg prot)=[(A4-A3)-(A2-A1)]÷(ε×d)×10 6×V 反总÷(Cpr×V 样)÷T =0.38×[(A4-A3)-(A2-A1)] ÷Cpr

2)按样本鲜重计算

活性单位定义:在 25℃或者 37℃中,每克样品每分钟催化 1μmol CDNB 与 GSH 结合为一个酶活性 单位。

GST(U/g 鲜重)=[(A4-A3)-(A2-A1)]÷(ε×d)×10 6×V 反总÷(V 样÷V 样总×W)÷T =0.38×[(A4-A3)-(A2-A1)] ÷W

3)按细胞数量计算

活性单位定义:在 25℃或者 37℃中,每 10 4个细胞每分钟催化 1μmol CDNB 与 GSH 结合为一 个酶活单位。

GST(U/10 4 cell)=[(A4-A3)-(A2-A1)]÷ε÷d×10 6×V 反总÷(500×V 样÷V 样总)÷T =0.38×[(A4-A3)-(A2-A1)] ÷500

4)按液体体积计算

活性单位定义:在 25℃或者 37℃中,每毫升液体每分钟催化 1μmol CDNB 与 GSH 结合为一个 酶活单位。

GST(U/mL)=[(A4-A3)-(A2-A1)]÷ε÷d×10 6×V 反总÷V 样÷T =0.38×[(A4-A3)-(A2-A1)] ε:产物摩尔消光系数,9.6×10 3 L/mol /cm;d:96 孔板光径,0.6cm;10 6:1mol=1×10 6μmol;

V 反总:反应体系总体积,220μL=2.2×10 -4 L;Cpr:上清液蛋白质浓度(mg/mL),需要另外测定,建 议选用本公司生产的 BCA 蛋白质浓度测定试剂盒;W :样品质量;V 样:加入反应体系中上清液 体积,20μL=0.02 mL;V 样总:试剂一体积,1 mL;T:反应时间(min),5min;500:细胞数量, 500 万。

注意事项: 

1. 样品处理等过程均需要在冰上进行,且须在当日测定酶活力;

2. 细胞中 GST 活性测定时,细胞数目须在 300 万-500 万之间,细胞中 GST 的提取时可加试剂一后 研磨或超声波处理,不能用细胞裂解液处理细胞;

3. 测定前先用 1~2 个样做预实验,如 5min 内反应不成线性,须对样品用蒸馏水稀释,计算结果乘 以稀释倍数;

4. 若样品测定吸光度大于 1,建议对样品用蒸馏水稀释,计算时结果乘以稀释倍数;

5. 测定反映的温度对测定结果有影响,请控制在 25℃或者 37℃(哺乳动物)。

 相关文献:

《Chronic toxicity and biochemical response of Apis cerana cerana (Hymenoptera: Apidae) exposed to acetamiprid and propiconazole alone or combined》 作者:Wensu Han,Yemeng Yang,Jinglin Gao,Dongxiang Zhao,Chengcai Ren,Shijie Wang,Shan ZhaoYihai Zhong 期刊:Ecotoxicology 影响因子:2.46 PMID:30874992
《Systemic response of the stony coral Pocillopora damicornis against acute cadmium stress》 作者:Zhi Zhou,Xiaopeng Yua,Jia Tang,Yibo Wu,Lingui Wang,Bo Huang 期刊:Aquatic Toxicology 影响因子:3.794 PMID:29179148
《Transcriptome Sequence Analysis Elaborates a Complex Defensive Mechanism of Grapevine (Vitis vinifera L.) in Response to Salt Stress》 作者:Le Guan , Muhammad Salman Haider , Nadeem Khan , Maazullah Nasim , Songtao Jiu , Muhammad Fiaz , Xudong Zhu , Kekun Zhang  and Jinggui Fang  期刊:International Journal of Molecular Sciences 影响因子:4.183 PMID:30545146
《2′,4′-Dihydroxy-6′-methoxy-3′,5′-dimethylchalcone, a potent Nrf2/ARE pathway inhibitor, reverses drug resistance by decreasing glutathione synthesis and drug efflux in BEL-7402/5-FU cells》 作者:Xing Wei,Xuejun Mo,Faliang An,Xiang Ji,Yanhua Lu 期刊:Food and Chemical Toxicology 影响因子:3.775 PMID:29626576
《A Damaged Oxidative Phosphorylation Mechanism Is Involved in the Antifungal Activity of Citral against Penicillium digitatum》 作者:Qiuli OuYang, Nengguo Tao* and Miaoling Zhang 期刊:Frontier in Immunology 影响因子:4.259 PMID:29503638
《Cadmium detoxification induced by salt stress improves cadmium tolerance of multi-stress-tolerant Pichia kudriavzevii》 作者:Chunsheng Li,Xianqing Yang,Ying Xu,Laihao Li,Yueqi Wang 期刊:Environmental Pollution 影响因子:5.714 PMID:30036838
《Effects of Phytase Transgenic Maize on the Physiological and Biochemical Responses and the Gut Microflora Functional Diversity of Ostrinia furnacalis》 作者:Xiao Hui Xu, Yinghui Guo, Hongwei Sun, Fan Li, Shuke Yang, Rui Gao & Xingbo Lu  期刊:Scientific Reports 影响因子:4.011 PMID:29535326