Cebrary^® Esophageal Cancer Organoid Growth Medium（Human） 食管癌类器官生长培养基是一种无血清可应用于细胞或组织来源的食管癌类器官的建立和长期培养过程，在细胞外基质存在的条件下，培养基所含特有组分及丰富的细胞因子能促使食管癌细胞迅速生长成并形成食管癌类器官，类器官形成过程平稳且迅速，同时保持较高的食管癌细胞特性和活力，为后续基于食管癌类器官的生理功能、疾病研究和精准医学提供支持。

产品组分

运输与保存方法

-20℃储存，有效期1年；2-8℃储存，有效期1月。

产品应用

无菌操作条件下配制食管癌类器官完全培养基。以下是准备100 mL完全培养基操作流程，如所需量不同，可相应调整用量。

1. 将营养组分1室温解冻或者2-8℃过夜缓融。避免反复冻融，现配现融；

2. 将基础培养基90 mL冰箱取出恢复至室温；

3. 将10 mL营养组分1加入到基础培养基内，均匀混合；如暂不使用，短时2-8℃储存。

4. 使用时可加入1%双抗使用。

人源食管癌原代培养

1. 取材：标本离体后，尽快取材。采用无菌器械，保证无菌环境，将肿瘤组织放入含有5 mL的原代组织保存液的 15 mL 离心管中，4℃转运。
2.  清洗：在生物安全柜中取出样品管，去除组织保存液，加入适量冷的添加有双抗的 PBS，反复清洗后，去除 PBS。
3. 重复清洗：重复第 2 步骤 3 次。
4. 组织处理：去除 PBS缓冲液后，将组织块移至 10 cm 含 10 mL 冷原代 组织保存液的无菌培养皿中，用无菌眼科显微剪将组织剪碎（直径约 0.5mm-1mm）。
5. 重复清洗：使用常温 PBS，重复清洗 3 次。
6. 收集组织碎片，加入组织消化液消化20-30 min，过70 um筛网，收集食管癌细胞。
7. 红细胞裂解：加入 10 mL 红细胞裂解缓冲液，室温下在翘板摇床上摇10min。
8. 重复清洗：裂解完毕，使用常温 DMEM/F12，重复第 2 步骤 3 次。
9. 类器官种板：调整细胞密度为2~3×10⁶，与基质胶1：1均匀混合，将细胞混悬液以40-60ul每孔种在24孔板中，37℃放置15-30 min，加入预热的类器官培养液，每个孔 750 uL。
10. 类器官培养：将培养板放在 37℃ CO₂ 培养箱培养。 每 2 天更换培养液。加入培养液时，吸头朝向侧壁，缓慢加入。
11. 类器官观察：每天观察类器官并拍照，了解初始类器官数量、增殖速 度、形态、微生物污染情况等。

注意事项

1. 产品的分装、使用等操作需在无菌环境下进行。

2. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

3. 本产品仅供科研使用，禁止用于人体。

Ver.CN20230506