产品内容：
提取液：液体100mL×1瓶，4℃保存；
试剂一：液体20mL×瓶，4℃保存；
试剂二：粉剂×1瓶，-20℃保存；
产品说明：
GDH（EC 1.4.1.2）广泛分布于植物中，和谷氨酸合成酶（GOGAT）共同参与谷氨酸的合成，在氨同化和转化成有机氮化合物的代谢中起重要作用。
GDH催化NH4+、α-酮戊二酸和NADH，生成谷氨酸和NAD+，引起340nm吸光度下降。通过测定340nm吸光度的下降速率，计算GDH活性。
需自备的仪器和用品:
     紫外分光光度计/酶标仪、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、微量石英比色皿/96孔UV板、研钵、冰和蒸馏水。
 
操作步骤：
一、粗酶液提取：
1、收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照每500万细菌或细胞加入1mL提取液，超声波破碎细菌或细胞（功率20％，超声3秒，间隔10秒，重复30次）；8000g4℃离心10分钟，取上清，置冰上待测。
2、称取约0.1g组织，加入1mL提取液进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心10分钟，取上清，置冰上待测。
二、测定步骤：
1、 紫外分光光度计或酶标仪预热30min以上，调节波长至340nm，蒸馏水调零。
2、 样本测定
（1）在试剂二中加入19mL试剂一充分溶解混匀，置于37℃（哺乳动物）或25℃（其它物种）水浴5min；
（2）在微量石英比色皿或96孔UV板中加入10μL样本和190μL试剂二，混匀，立即记录340nm处20s时的吸光值A1和 5min20s后的吸光值A2，计算ΔA=A1-A2。注：当ΔA大于0.5时，将样本进行稀释后测量。
三、GDH活性计算：
a.用微量石英比色皿测定的计算公式如下
（1）按样本蛋白浓度计算：
单位的定义：每mg组织蛋白每分钟消耗1 nmol NADH定义为一个酶活力单位。
GDH（U/mg prot）＝[ΔA×V反总÷（ε×d）×109]÷(Cpr×V样) ÷T=643×ΔA÷Cpr
（2）按样本鲜重计算：
单位的定义：每g组织每分钟消耗1 nmol NADH定义为一个酶活力单位。
GDH（U/g 鲜重）＝[ΔA×V反总÷（ε×d）×109]÷(V样÷V样总×W)  ÷T=643×ΔA÷W
（3）按细菌或细胞密度计算：
单位的定义：每1万个细菌或细胞在反应体系中每分钟消耗1 nmol NADH定义为一个酶活力单位。
GDH（U/104 cell）＝[ΔA×V反总÷（ε×d）×109]÷(V样÷V样总×500)  ÷T=1.286×ΔA
V反总：反应体系总体积，2.×10-4 L；ε：NADH摩尔消光系数，6.22×103L/mol/cm；d：比色皿光径，1cm；V样：加入样本体积，0.01 mL；V样总：加入提取液体积，1 mL；T：反应时间，5 min；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样品质量，g；500：细菌或细胞总数，500万。
b.用96孔UV板测定的计算公式如下
（1）按样本蛋白浓度计算：
单位的定义：每mg组织蛋白每分钟消耗1 nmol NADH定义为一个酶活力单位。
GDH（U/mg prot）＝[ΔA×V反总÷（ε×d）×109]÷(Cpr×V样) ÷T=1286×ΔA÷Cpr
（2）按样本鲜重计算：
单位的定义：每g组织每分钟消耗1 nmol NADH定义为一个酶活力单位。
GDH（U/g 鲜重）＝[ΔA×V反总÷（ε×d）×109]÷(V样÷V样总×W)  ÷T=1286×ΔA÷W
（3）按细菌或细胞密度计算：
单位的定义：每1万个细菌或细胞每分钟消耗1 nmol NADH定义为一个酶活力单位。
GDH（U/104 cell）＝[ΔA×V反总÷（ε×d）×109]÷(V样÷V样总×500)  ÷T=0.643×ΔA
V反总：反应体系总体积，2.×10-4 L；ε：NADH摩尔消光系数，6.22×103L/mol/cm；d：96孔板光径，0.5cm；V样：加入样本体积，0.01 mL；V样总：加入提取液体积，1 mL；T：反应时间，5 min；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样品质量，g；500：细菌或细胞总数，500万。
相关文献：
《Knockout of SlSBPASE Suppresses Carbon Assimilation and Alters Nitrogen Metabolism in Tomato Plants》 作者:Fei Ding, Qiannan Hu, Meiling Wang and Shuoxin Zhang 期刊:International Journal of Molecular Sciences 影响因子:4.183 PMID:30558146