产品内容：
试剂一：50mL×1 瓶，-20℃保存；
试剂二：10mL×1 瓶，-20℃保存；
试剂三：1mL×1 支，-20℃保存；
试剂四：液体60mL×1 瓶，4℃保存；
试剂五：粉剂×1 支，4℃保存；
试剂六：粉剂×1 支，-20℃保存；
试剂七：粉剂×1 支，-20℃保存; 临用前加入3mL 蒸馏水充分混匀待用，现配现用。
工作液的配制：临用前把试剂五、试剂六转移到试剂四中混合溶解待用；用不完的试剂4℃保存一周；
产品说明：
 ICDHm（EC 1.1.1.41）广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞的线粒体中，在三羧酸循中催化异柠檬酸生成α-酮戊二酸，同时将NAD+ 还原为NADH，是三羧酸循环的限速酶之一，其催化的反应是细胞NADH 主要来源之一。
ICDHm 催化NAD+ 还原生成NADH，导致340nm 处光吸收上升。
试验所需自备仪器和样品：
紫外分光光度计、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、1 mL 石英比色皿、研钵、冰和蒸馏水。
操作步骤：
一、 样本的前处理：
组织、细菌或细胞中胞浆蛋白与线粒体蛋白的分离：
1、 称取约0.1g 组织或收集500 万细菌或细胞，加入1mL 试剂一和10uL 试剂三，用冰浴匀浆器或研钵匀浆。
2、 将匀浆600g，4℃离心5min。
3、 弃沉淀，将上清液移至另一离心管中，11000g，4℃离心10min。
4、 上清液即胞浆提取物，可用于测定从线粒体泄漏的ICDHm（此步可选做）。
5、 在步骤④的沉淀中加入200uL 试剂二和2uL 试剂三，超声波破碎（冰浴，功率20％或200W，超声3 秒，间隔10 秒，重复30 次），用于线粒体ICDHm 活性测定。
二、 测定步骤
1、 分光光度计预热30min 以上，调节波长至340nm 处，蒸馏水调零。
2、 工作液于 37℃（哺乳动物）或25℃（其它物种）孵育5min。
3、在1mL 石英比色皿中依次加入60μL 试剂七、80μL 样本和1mL 工作液，混匀，立即记录340nm 处20s 时的吸光值A1 和2min20s 时的吸光值A2，计算ΔA=A2-A1。
三、 ICDHm 活性计算
（1） 按样本蛋白浓度计算
单位的定义：每mg 组织蛋白每分钟生成1 nmol 的NADH 定义为一个酶活性单位。
ICDHm 活性（nmol/min /mg prot）＝[ΔA×V 反总÷（ε×d）×109]÷(Cpr×V 样) ÷T=1145×ΔA÷Cpr
（2） 按样本鲜重计算
单位的定义：每g 组织每分钟生成1 nmol 的NADH 定义为一个酶活性单位。
ICDHm（nmol/min /g 鲜重）＝[ΔA×V反总÷（ε×d）×109]÷(W ×V样÷V样总) ÷T=231.3×ΔA÷W
（3） 按细菌或细胞密度计算
单位的定义：每1 万个细菌或细胞每分钟生成1 nmol 的NADH 定义为一个酶活性单位。
ICDHm 活性（nmol/min/104 cell）＝[ΔA×V 反总÷（ε×d）×109]÷(500×V 样÷V 样总)÷T=0.463×ΔA
V 反总：反应体系总体积，1.14×10-3 L；ε：NADH 摩尔消光系数，6.22×103L / mol /cm；d：比色皿光径，1cm；V 样：加入样本体积，0.08 mL；V 样总：加入提取液体积，0.202 mL；T：反应时间，2min；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量，g；500：细菌或细胞总数，500 万。
 相关文献：
《lncRNA Ftx promotes aerobic glycolysis and tumor progression through the PPARγ pathway in hepatocellular carcinoma》 作者:Xiao Li, Qi Zhao, Jianni Qi, Wenwen Wang ,Di Zhang ,Zhen Li, Chengyong Qin 期刊:International Journal of Oncology 影响因子:3.571 PMID:29845188