原核蛋白表达与纯化服务
产品名称： 原核蛋白表达与纯化服务
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武汉摩尔生物科技有限公司
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服务简介：
目前，原核蛋白表达系统是最成熟可靠的蛋白表达系统，适合于快速表达纯化各种不同来源蛋白。大量制备的重组蛋白可用于药物筛选、结构生物学研究、细胞生物学研究、蛋白质组学研究等的一系列生物医学领域的研究。
摩尔生物公司通过筛选测试表达载体与表达菌株、优化表达体系及诱导表达条件、摸索包涵体复性条件等，极大程度的解决蛋白难以可溶表达纯化等难题。摩尔公司向广大客户提供专业的蛋白表达纯化外包服务，包括表达质粒构建、原核蛋白表达纯化、真核蛋白表达纯化、以及蛋白纯化后除菌去内毒素分装、纯度检测等服务，并提供各种检测报告。客户的需求是公司发展的首要前提，我们会全心全意的完成客户订单任务。
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主要步骤
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内容
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交付内容
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交付时间
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目标基因全基因合成
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1. 从基因库中搜索目标蛋白的cDNA序列。
2. 根据选用的表达系统对cDNA进行密码子优化。 3. 合成设计好的基因序列。 |
目的基因（在T载体或常规穿梭载体上）及测序报告。
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2周
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目标基因亚克隆
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1. 扩增并抽提含有目标基因的载体质粒。
2. 将目标基因亚克隆到合适的表达质粒上。 3. 测序验证构建质粒的准确性。 4. 可提供表达载体。 |
正确构建的重组表达质粒，含重组质粒的DH5α菌株及测序报告。
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有模板： 2-3周
无模板： 4周
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E. coli 表达菌株转化及筛选
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1. 扩增并抽提构建好的表达质粒。
2. 将表达质粒转化到高效的E. coli表达菌株中。 3. 至少挑选5个阳性克隆于LB培养基中扩增并选择合适的条件，SDS-PAGE 检测蛋白表达情况，筛选出合适菌株。 4. 可提供表达菌株： JM109, BL21 (DE3), Rosetta(DE3),等。 |
重组质粒的表达菌株及表达检测报告
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2-3周
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目标蛋白表达及纯化
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1. 对时间，温度以及IPTG浓度等表达条件进行优化，诱导表达目标蛋白。
2. 摇瓶培养1L重组细菌，通过亲和，离子交换，疏水及凝胶过滤等层析方法纯化表达的重组蛋白。 3. 利用蛋白酶去除不需要的纯化标签（Tag），再纯化获得所需的目标蛋白（可选，构建表达载体需加入合适的蛋白酶切位点）。 4. 通过SDS-PAGE电泳检测每步结果并控制最终产品质量。
5. .通过Western-blot验证目标蛋白正确性(可选)。 |
纯化好的目标蛋白1mg以上及纯化报告。可按客户要求提供含纯化标签（Tag）或切除纯化标签（Tag）的最终蛋白，纯度最高可达95%以上。
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2-3周
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目标蛋白的再加工及详细检测
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1. 对生物学活性要求较高的纯化后蛋白产品进行复性研究。
2. 内毒素去除，除菌，冻干等进一步加工。 3. 通过HPLC，质谱等方法详细检测目标蛋白的质量 |
加工后的终产品及相关实验和检测报告
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2-3周
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大规模制备
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按照小试工艺放大生产规模，制备客户需要的合格蛋白产品。
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合格的目标蛋白及服务报告
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协商
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