RNAi载体构建服务

我们优势：

质量保证：针对一个基因的不同位置设计4条miRNA序列，在转染效率>80%的前提下，我们保证至少2个克隆在mRNA水平
达到70%以上的Knockdown效率
多种平台载体可供选择：shRNA载体，miRNA干扰载体（第二代干扰载体），miR-shRNA载体（第三代干扰载体）
利用绿色荧光蛋白（GFP）和感兴趣的RNAi序列协同表达，方便追踪
可将多个RNAi序列串联到同一表达载体中并同时表达，进行多个靶基因的同时干扰

原理：
RNA干扰（RNAi）是有效抑制基因表达以及研究各种细胞类型中蛋白质功能的最佳方法。相比传统的短/小干扰RNA（siRNA），
使用载体进行RNAi实验极大地扩展了实验的可能性。
采用载体技术能够：
实现瞬时或稳定的靶标抑制
在任何类型的细胞（甚至是难转染的细胞、原代细胞和非分裂细胞）中执行 RNAi
通过诱导型RNAi表达来调控基因抑制
选择稳定表达RNAi序列的纯细胞群
通过组织特异性启动子控制体内基因表达

我们的RNAi载体构建，有以下选择：
1) shRNA干扰载体构建：短发卡RNA（shRNA）是可以克隆到表达载体并表达短的干扰RNA（siRNA，19 - 21个核苷酸的
RNA双链)的DNA分子。我们可根据靶标设计短发卡RNA (shRNA)序列并将其克隆入shRNA载体上。
2) miRNA（microRNA）干扰载体构建：属于第二代RNA干扰载体平台，拥有更高干扰效率和RNA干扰片段设计成功率。
miR RNAi表达载体采用Pol II启动子表达人工设计的miRNA，后者从长的转录本被加工，进而导致特异性的mRNA的降解。
3) shRNAmir是用19nt的siRNA序列替代miRNA中的作用序列，保持miRNA的环和双臂结构。基于miRNA mir-30或miRNA
mir-155双臂结构的shRNAmir质粒载体RNAi效果更好：shRNAmir是目前效果最好的RNAi产品形式。

服务流程：

1) 客户提供：基因的Accession Number

2) 针对特定基因，设计RNAi序列；合成该序列并退火生成双链DNA

3) 将DNA与RNAi载体相连，连接物转化大肠杆菌

4) 测定全长序列以鉴定序列的正确性；制备甘油菌

5) 提供数据分析和报告给客户

6) 我们提供：构建好的RNAi表达载体和相应的甘油菌