Biozellen 3D细胞、类器官培养基质胶-干细胞-试剂-生物在线
Biozellen 3D细胞、类器官培养基质胶

Biozellen 3D细胞、类器官培养基质胶

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产品名称： Biozellen 3D细胞、类器官培养基质胶

英文名称：

产品编号： B-P-00002

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产品产地： 美国

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上海转染生物科技有限公司
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Biozellen®3D 细胞培养基质胶套装


用 途：                                                                                                                

  •   3D 细胞球体培养试验
  •  小鼠皮下成瘤
  •  细胞迁移实验
  •  适合用于 3D 细胞药物筛检平台
  •  细胞生长和分化
  •  代谢/毒理学研究

 主要特点：

  •     100%植物原材料，无任何动物成分
  •     基质胶氨基酸序列100%人源化
  •     成分分明，无生长因子和含生长因子可选择
  •     可调整基质胶的胶体硬度进行多种细胞培养
  •     生物相容性好，不会引起机体或细胞免疫反应
  •     3D培养结束后基质胶可以温和融化，并保留3D细胞/类器官结构完整性
  •     无人畜共患病或毒素风险
  •     最适合用于医疗级生物原料
  •     胶体高度透明，便于观察表征
  •     2年保存时间

  使用步骤：

A、试剂制备

A 基质胶：将 A 基质胶溶于 37℃水浴槽回温 10 分钟， 确认完全融解.

C 缓冲溶液(1X)制备：使用前将 10X C 缓冲溶液用冰的无细胞培养液(例如： 无血清 DMEM、opt-MEM) 制

备成 1X C 缓冲溶液。(不要用 PBS 稀释 C 缓冲液) .

D 缓冲溶液(1X)制备: 使用前用冷的 1x PBS 稀释 10X D 缓冲溶液至 1X D 缓冲溶液.

B、Biozellen®3D 细胞培养基质胶的制备

全部步骤需要在无菌环境内操作，操作步骤如下：

1. 将 24 孔培养板放置于冰上预冷半小时。

2. 细胞计数后取 2×105~2×107 细胞与 0.5 毫升 37℃ 细胞培养基均匀混合，并与 0.5 毫升 37℃ A 胶按

照 1:1 等比例均匀混合，最终细胞密度 1*105~1*107cells/mL。

注：请选择适当的培养溶液与条件进行试验。

3.取 20-40 微升步骤 2 的混合液滴于 步骤 1 预冷的培养板上，胶体将于 5 分钟内成胶。 注: 测试胶体

是否成胶，可用微量吸管尖温和的触碰胶体表面进行确认。

4.待胶体成胶后，添加 1 毫升冰的 1X C 缓冲溶液，并盖过步骤 3 的胶溶液，固定 15 分钟。

5.待 15 分钟固定后，小心的吸取 C 缓冲溶液并置换为适合此细胞生长之培养基溶液。  

6. 将含有细胞的胶于 37°C 二氧化碳培养箱内进行 7~14 天的培养，并观察细胞球体的形成，按正常培养基 更换频率进行更换操作。

C、溶胶与收集细胞球体准备程序
小心的将培养基吸取移除，并用 1X PBS 进行清洗。
小心的将 1X PBS 吸取移除，并添加 1 毫升冰的 D 缓冲溶液，盖过胶滴于室温反应 5 分钟。
温和的用 1 毫升移液管吸取，直到胶滴完全溶解。
将含有细胞球体的溶液吸入 1.5 毫升离心管，用 1000 rpm 的转速离心 10 分钟，移除上清液体并收集细胞
球体做分析。
D、收集单颗细胞准备程序
在分离单细胞前，先按上述溶胶与收集细胞球体准备程序进行操作
1. 添加 trypsin-EDTA 并与收集的细胞球体于 37°C 混合反应。
2. 用 1 毫升移液管混合，直到细胞体完全分解。
3. 待细胞球体完全分解，加入 3 倍体积的 1X PBS，并用 1000 转的转速进行离心 10 分钟，并移除上清
液体收集沉淀的单细胞做分析。
E、细胞迁移实验准备程序
1. 准备 Transwell 装置及无血清 DMEM 细胞培养液 (用于稀释 A 胶)。
2. A 胶 (2X) (货号:B-P-00002-A) 置于 37 ℃水浴槽回温 10 分钟，确认完全融解。
3. 用无血清 DMEM 细胞培养液将 A 胶 (2X)稀释 50 倍。
4. 根据 Transwell 上室底部面积加入 100-120 ul/cm2稀释后的 A 胶稀释液到 Transwell 上室中。
5. 将步骤 4 在 4 ℃冰箱孵育 30 分钟。
6. 将多余的稀释液吸出，并在 Transwell 上室中加入无血清的癌细胞系细胞悬浮液使细胞浓度约 7.5 x 104
cells/well.。
7. 在 Transwell 下室中加入含 10 %血清的细胞培养液做为 chemoattractant，吸引癌细胞系进行迁移。
F、小鼠皮下成瘤实验准备程序
1. 将 A 胶 (2X) (货号:B-P-00002-A) 置于 37 ℃水浴槽回温 10 分钟，确认完全融解。
2. 将C 缓冲溶液(10X) 货号:B-P-00002-C)与冰的无血清细胞培养液 (例如: 无血清 DMEM或内含VEGF、
heparin 的无血清 DMEM) 按 1:4 比例均勻混合配置。(例如:1 ml C 缓冲溶液(10X) 與 4 ml 无血清 DMEM
混合，不可用 PBS 稀释)
3. 将 A 胶 (2X) 与约 2*106 cells/ml 的癌细胞系悬浮液按 1:1 等比例均匀混合配置，癌细胞系悬浮液最终
浓度约为 106 cells/ml。
4. 选用 21-25 G 的针头 (避免破坏细胞)，抽取 0.2-0.3 ml 预冷稀释后的 C 缓冲溶液。(C 缓冲溶液用于 A
胶成胶反应)
5. 使用步骤 4 的同一支针管，再抽取 0.1-0.7 ml 含细胞的 A 胶混合液，在冰上孵育五分钟。
6. 以皮下注射方式注射 0.3-1.0 ml 至小鼠。(需一次注射完含 C 缓冲溶液的 A 膠混合液)
注 1: 注射体积可依不同实验目的做调整，若为血管生成研究注射体积需至少 0.5 ml。
注 2: 此步骤依实验需求可执行或不执行，若需呈现明显的皮下注射隆起效果，可于注射完毕后，在小鼠注
射部位冰敷 5-10 分钟。
7. 培养一至三周后可摘取接种的肿瘤组织。
注 3: 若为血管生成研究，应注射含 VEGF 及 heparin 的 A 胶，以促进血管生成。约三天后，可摘取含有
新血管生成的肿瘤组织。

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