小翊课堂 | 免封闭PAGE凝胶快速制备操作指南及配胶常见问题解析

来源: 上海翊圣生物科技有限公司   2020-10-9   访问量:1205评论(0)

 

免封闭PAGE凝胶快速制备操作指南及配胶常见问题解析

 

翊圣生物近期推出了自主研发的新一代免封闭彩色PAGE凝胶快速制备试剂盒系列产品(#20324-20326,用户只需自备制胶设备即可配胶,大大简化了制胶过程哟。
为了让广大客户更好的使用,小翊特意为你们制作了如下视频——免封闭PAGE凝胶快速制备操作小视频》
01
PAGE凝胶制备常见问题


1、为何制备分离胶、浓缩胶时,未加到胶板中胶已经凝固?
目前翊圣开发的PAGE凝胶制备试剂盒,凝胶的速度上相比较传统的方法更加迅速,以及受到外界环境温度的影响,也导致凝胶的速度变快。此时,可有效控制促凝剂过硫酸铵的用量(比如减半使用)来更好的解决凝胶过快带来的来不及灌胶问题。再次,不推荐一次性的制备过多的胶板,2-3块为最优,当然,制胶比较熟练的客户可以制备多的胶板。

2、为什么在混匀缓冲液时,会有很多气泡产生?
翊圣开发的PAGE凝胶试剂盒,分离胶缓冲液和浓缩胶缓冲液中存在SDS变性剂成分,如果在混匀缓冲液的过程中移液枪吹吸过快以及晃动太激烈,都会出现太多的气泡,如果等待气泡消失,可能此时配胶杯中的凝胶已经凝固。因此,加入促凝剂之后仅需缓慢的晃动配胶杯即可,无需剧烈混匀。

3、浓缩胶与分离胶断裂、板间有气泡对电泳有影响吗?
这主要出现在初学者中,如果可用缓冲液将胶与胶板之间的气泡冲走,一般对电泳不会有太大的影响。上述问题前者主要原因是拔梳子用力不均匀或过猛所致;后者是由于在解除制胶的夹子后,板未压紧而致空气进入引起的。

4、为什么胶在拔梳子之后出现胶条撕裂的现象以及胶孔底面凸起的现象?
1)本试剂盒制备的凝胶,切勿暴漏在空气中太久,尽量在配置20分钟左右进行使用;
2)拔梳子时,需要先将凝胶浸泡在电泳缓冲液中,并快速的将梳子拔出,切勿拉扯,以至凝胶变形。
3)配胶时,可将APS的使用量减半,避免凝胶过硬,胶梳与凝胶粘连太紧,而难以拔梳。

5、分离胶灌胶液面总是不平怎么办?
1) 玻璃没有洗干净;
2) 改良型过硫酸铵APS的加量不合适,加量相对较多,凝胶凝固过快也会胶不平。
3) 混合试剂时没有很好的摇匀,导致有些部位的聚合剂浓度过高,聚合相对较快造成胶不平;
4) 温度也是影响胶聚合的重要因素,可能为了让胶更快的凝固而把胶放到 50 度的温箱,由于受热不均匀,也会造成胶聚合不均匀。
5)加完胶液以后,用水或者乙醇进行压胶,也轻轻敲打或者轻轻晃动配胶板(幅度不要太大)辅助液面趋平。
02
特别提示:免封闭PAGE凝胶注意事项


1、免封闭凝胶操作手法的注意:
1)免封闭PAGE凝胶配置手发需要更加熟练,配置完分离胶后,需要同时灌注浓缩胶,利用两者的重力效应,将分离胶压平。
2)插入胶梳时需要小心,如果过快,可能会导致垂直的冲击力,导致上下层胶发生混合。
3)如果上层胶来不及添加,免封闭胶也可进行封闭(即用乙醇进行封平)。

2、免封闭如出现分离胶的线压不直?
因为是免封闭的,下面分离胶没有凝固好,如果用力较大或者速度较快容易把分离胶冲开导致浓缩胶和分离胶混合,加浓缩胶时需要缓慢的加入胶板之中,浓缩胶加到一层之后可移动枪头进行加液,此时速度也要慢。在插入梳子时,要轻柔一些,防止液体流动过于剧烈。

3、免封闭PAGE凝胶超快速制备试剂盒制备的凝胶放在转膜液中,体积有稍许变大?
丙烯酰胺凝胶属于水凝胶,这是水凝胶的溶胀现象,水凝胶会吸收周围的水分,凝胶密度越大,就越容易吸收,而免封闭,分离胶的密度于普通款相比密度更大,所以溶胀更明显一些,不会影响后续实验。


 

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