Puromycin Dihydrochloride嘌呤霉素盐酸盐

产品详细描述

Puromycin Dihydrochloride嘌呤霉素盐酸盐
产品信息
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价格（元）
促销价（元）
Puromycin Dihydrochloride嘌呤霉素盐酸盐
60210ES25
25 mg
-20℃
678.00
356.00
Puromycin Dihydrochloride嘌呤霉素盐酸盐
60210ES60
100 mg
-20℃
2028.00
1356.00
Puromycin Dihydrochloride嘌呤霉素盐酸盐
60210ES72
250 mg
-20℃
4478.00
2886.00
Puromycin Dihydrochloride嘌呤霉素盐酸盐
60210ES76
500 mg
-20℃
8558.00
4896.00
Puromycin Dihydrochloride嘌呤霉素盐酸盐
60210ES80
1 g
-20℃
15192.00
8326.00
产品描述
嘌呤霉素（Puromycin）是由白黑链霉菌（Streptomyces alboniger）发酵代谢产生的一种氨基糖苷类抗生素，通过抑制蛋白质合成而杀死革兰氏阳性菌，各种动物和昆虫细胞。某种特殊情况下有效作用大肠杆菌。作用机制在于嘌呤霉素是氨酰-tRNA分子3’末端的类似物，能够与核糖体的A位点结合并掺入到延伸的肽链中。嘌呤霉素同A位点结合后，不会参与随后的任何反应，从而导致蛋白质合成的提前终止并释放出C-末端含有嘌呤霉素的不成熟多肽。
   嘌呤霉素产生菌Streptomyces alboniger内发现的pac基因编码嘌呤霉素N-乙酰转移酶（PAC），赋予机体对嘌呤霉素产生抗性。这一特性如今普遍应用于筛选特定携带pac基因质粒的哺乳动物稳定转染细胞株。
嘌呤霉素在细胞稳转株筛选中的普遍应用与慢病毒载体的特性有关，现在商业化的慢病毒载体多数都携带pac基因。在某些特定情况下，嘌呤霉素亦可以用来筛选转化携带pac基因质粒的大肠杆菌菌株。
产品性质
CAS号（CAS NO.）
58-58-2
分子式（Formula）
C22H29N7O5·2HCl
分子量（Molecular weight）
544.43
纯度（Purity, HPLC）
＞98%
外观（Appearance）
白色至米白色粉末
结构式（Structure）
 
运输和保存方法
冰袋运输。-20℃干燥保存，2年有效。
 
使用方法 
1. 建议使用浓度
哺乳动物细胞：1-10 μg/mL，最佳浓度需要杀灭曲线来确定；
大肠杆菌：LB琼脂培养基筛选稳定转化pac基因的大肠杆菌，使用浓度为125 μg/mL。
【注】：使用嘌呤霉素筛选大肠杆菌稳转株需要精确的pH值调节，而且受宿主细胞本身的影响。
2. 溶解方法
用蒸馏水溶解嘌呤霉素配制成50 mg/mL的母液，经0.22 μm滤膜过滤除菌后分装于-20℃冻存；也可溶于甲醇，配制成10 mg/mL的储存液。
3. 嘌呤霉素杀灭曲线的确定（以shRNA转染或者慢病毒转导为例）
嘌呤霉素有效筛选浓度跟细胞类型、生长状态、细胞密度、细胞代谢情况及细胞所处细胞周期位置等有关。为了筛选到稳定表达的shRNA细胞株，确定杀死未转染/转导细胞的最低浓度嘌呤霉素至关重要。建议初次做实验的客户一定要建立适合自身实验体系的杀死曲线（kill curve）。
1）Day 1：24孔板内以5~8×104 cells/孔的密度铺板，铺足够量的孔以进行后续的梯度实验。37℃细胞孵育过夜；
2）Day 2：①准备筛选培养基：含不同浓度嘌呤霉素的新鲜培养基（如0-15 μg/mL，至少5个梯度）；②往孵育过夜后的细胞内更换新鲜配制的筛选培养基；之后37℃孵育细胞；
3）Day 4：更换新鲜的筛选培养基，并观察细胞存活率。
4）根据细胞的生长状态，约2-3天更换新鲜的筛选培养基；
5）每日监测细胞，观察存活细胞率，从而确定抗生素筛选开始4-6天内有效杀死非转染或所有非转导细胞的药物最低浓度。
4. 哺乳动物稳定转染细胞株的筛选
等转染含有pac基因的质粒后，细胞在含有嘌呤霉素的培养基中增殖，以筛选出稳定转染子。
1）细胞转染48 h后，将细胞（原样或稀释）置于含有适当浓度嘌呤霉素的新鲜培养基中培养。
【注】：当细胞处于分裂活跃期时，抗生素作用最明显。细胞过于密集，抗生素产生的效力会明显下降。最好进行细胞分盘使其密度不超过25%。
2）每隔2-3天，移除和更换含有嘌呤霉素的培养基。
3）筛选7天后评估细胞形成的病灶。病灶可能需要额外的一周或者更多时间，这依赖于宿主细胞系和转染筛选效率。
【注】：每日进行细胞生长状态的观察。嘌呤霉素的筛选至少需要48 h，有效浓度嘌呤霉素的筛选周期一般在3-10天。
4）转移和放置5-10个抗性克隆到一个35 mm的培养皿中，用选择培养基继续培养7天。此次富集培养是为日后的细胞毒性实验做准备。
注意事项
1）嘌呤霉素为有毒化合物，操作时请小心拿放； 
2）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
 
HB180517