Western blot所必须的内参及标签抗体 ——衡量WB成功的标尺

来源: 上海翊圣生物科技有限公司   2020-5-26   访问量:667评论(0)

Western blot所必须的内参及标签抗体

——衡量WB成功的标尺

何为内参抗体、何为标签抗体

内参抗体

内参即内部参照(Internal Control),类似于荧光定量实验的内参基因,对于哺乳动物细胞表达来说一般是指由看家基因编码表达的蛋白(Housekeeping Proteins),它们在不同组织和细胞中的表达相对恒定,常用它作为检测目的蛋白表达水平变化时来做参照物。

2内参抗体的选择:

1样本种属来源

l 哺乳动物的组织或者细胞样本通常选择β-actinβ-tubulinGAPDHLamin BHistone H3NaKAtpase等。

l 植物来源实验样本,则可以选择plant actinRubisco等。

l 根据来源样本选择不同的内参,是WB实验成功的关键。也可参照文献报导,选择合适的蛋白作为内参。

2目的蛋白分子量

选择内参抗体时,应该考虑目的蛋白分子量的大小。通常应该保证目的蛋白与内参蛋白分子量相差5 KD以上。比如目的蛋白分子量为45 KD,此时不适宜选择β-actin43 KD作为内参,可以考虑选择GAPDH或者β-tubulin作为内参。

3内参蛋白的表达部位

1 不同部位内参蛋白展示图

标签抗体

标签抗体的组成一般分为蛋白标签和目的蛋白两部分。标签抗体的合成主要是将蛋白标签是利用DNA体外重组技术,与目的蛋白一起融合表达的一种多肽或者蛋白,以便于目的蛋白的表达、检测、示踪和纯化等。标签抗体(Tag Antibody)可用于检测和纯化各种商品化表达载体上的标签序列,分析目的蛋白的表达含量及其功能。其原理是抗原抗体反应,这些标签抗体可以高度特异地结合对应的标签融合蛋白。

标签抗体的选择可遵循以下原则:

l 检测蛋白A+His标签,选择抗His抗体;检测蛋白B+MBP标签,选择抗MBP抗体;

标签抗体是开展基因蛋白表达、信号转导和基因功能研究的常用工具。随着技术的不断发展,相继开发得到具有各种不同功能的蛋白标签,常见的蛋白标签有HisFlagGSTMBPHAMycGFP 等。

1 不同标签功能介绍

融合标签

大小(KD

功能

是否切除

HIS

0.84

有利纯化,能纯化可溶性/包涵体蛋白

小标签,不影响蛋白功能

GST

26

增强可溶性,仅能纯化可溶性蛋白

大标签,需切除

MBP

44.4

增强可溶性,减弱毒性蛋白

大标签,需切除

NusA

55

增强可溶性,减弱毒性蛋白

大标签,需切除

SUMO

11.2

增强可溶性,减弱毒性蛋白

大标签,需切除

翊圣标签抗体与内参抗体

标签抗体

货号

名称

分子量

应用

WB稀释比例

价格(元)

30503ES20

Flag-Tag, Mouse mAb

20μl 

IF,WB,IP

1:1000-1:5000

248

Flag-Tag, Mouse mAb

100μl

IF,WB,IP

1:1000-1:5000

748

Flag-Tag, Mouse mAb

1ml

IF,WB,IP

1:1000-1:5000

3287

Flag-Tag, Mouse mAb

5ml

IF,WB,IP

1:1000-1:5000

13687

30401ES50

His-tag, Mouse mAb

50µl

ELISA, IF, WB, IP 

1:2000-1:20000

688

30601ES60

Myc-tag, Mouse mAb

100μl

ELISA, IF, IP, WB

1:5000

748

30701ES60

HA-Tag, Mouse mAb

100μl

WB, IP 

1:10000

748

30901ES50

GST-tag, Mouse mAb

50μl

ELISA, WB, IP

1:5000-50000

688

内参抗体

货号

名称

规格

应用

WB稀释比

价格(元)

30101ES50

β-actin, Mouse mAb

50 µl

ELISA, IF, WB, IHC, FC, IP

1:5000-50000

688

30102ES60

β-actin, Rabbit pAb

100 ul

ELISA, IF, WB, IHC

1:1000-10000

998

30201ES60

GAPDH (Clone:1A6), Mouse mAb

20 µl

ELISA, IF, WB, IHC

1:10000

738

30202ES60

GAPDH, Rabbit pAb

100 ul

WB

1:2000

588

30301ES60

β-Tubulin, Mouse mAb

100 µl

IF, WB, IHC ,IP

1:1000

948

30302ES60

β-Tubulin, Rabbit pAb

100 µl

IF, IHC, IP

1:5000-10000

748

30304ES60

α-Tubulin, Rabbit pAb

100 µl

WB, IF, IHC, IP

1:5000-10000

948

其他常用内参类型推荐

货号

名称

分子量

品牌

细胞核膜

Lamin A/C

65-75 KD

代理品牌

Lamin B1

66-72 KD

代理品牌

细胞核

YY1

65-70 KD

代理品牌

TBP

33-43 KD

代理品牌

Histone H3

15-17 KD

代理品牌

PCNA

36 KD

代理品牌

胞浆或全细胞

GAPDH

36 KD

代理品牌

β-actin

42 KD

代理品牌

Vinculin

117 KD

代理品牌

β-Tubulin

50-55 KD

代理品牌

α-Tubulin

50-55 KD

代理品牌

膜蛋白

ATP1A1

97-110 KD

代理品牌

线粒体

COX412

17-20 KD

代理品牌

COX411

17-20 KD

代理品牌

Porin

31-37 KD

代理品牌

全血/血浆/血清

Albumin

66 KD

代理品牌

标签抗体标记的蛋白纯化产品

1 Anti-Flag亲和纯化凝胶

Anti-Flag亲和纯化凝胶由高质量的鼠源 IgG2b单克隆抗体与Sepharose 4B gel 通过供价偶联制备,本产品具有较高的Flag标签融合蛋白加载容量(至少为1.1mg protein/ml gel),杂蛋白非特异结合少,可用于蛋白质免疫沉淀(IP)和蛋白质纯化。

Anti-Flag亲和纯化凝胶可结合Met修饰的NFlag融合蛋白(Met-FLAG–Protein),NFlag 融合蛋白(FLAG–Protein),CFlag 融合蛋白(Protein-FLAG)。

2 Anti-Flag亲和纯化凝胶IP后蛋白电泳图

1, 国外品牌 2,Yeasen抗体浓度:7.5mg抗体/ml凝胶蛋白结合量:1.25mg蛋白/mL凝胶蛋白纯度:>95%

3 不同品牌Flag凝胶价格比对图

货号

名称

规格

价格

20585ES03

Anti-DYKDDDDK (Flag) Affinity GelAnti-Flag亲和纯化凝胶)

1ml

1487

20585ES08

Anti-DYKDDDDK (Flag) Affinity GelAnti-Flag亲和纯化凝胶)

5ml

4797

20585ES25

Anti-DYKDDDDK (Flag) Affinity GelAnti-Flag亲和纯化凝胶)

25ml

20987

20585ES60

Anti-DYKDDDDK (Flag) Affinity GelAnti-Flag亲和纯化凝胶)

100ml

76187

2 琼脂糖凝胶偶联标签抗体

琼脂糖凝胶偶联标签抗体由高质量的鼠源单克隆抗体与Sepharose 4B gel 通过供价偶联制备,具有较高的标签融合蛋白加载容量,杂蛋白非特异结合少,可用于蛋白质免疫共沉淀和少量蛋白质纯化。

货号

名称

规格

价格(元)

20586ES03/20586ES08

Anti-HA Affinity Gel Anit-HA亲和纯化凝胶)

1ml/5ml

1487/4797

20586ES25/20586ES60

Anti-HA Affinity Gel Anit-HA亲和纯化凝胶)

25ml/100ml

20987/76187

20587ES03/20587ES08

Anti-Myc Affinity Gel Anti-Myc标签亲和纯化凝胶)

1ml/5ml

1487/4797

20587ES25/20587ES60

Anti-Myc Affinity Gel Anti-Myc标签亲和纯化凝胶)

25ml/100ml

20987/76187

20588ES03/20588ES08

Anti-V5 Affinity Gel Anti-V5标签亲和纯化凝胶)

1ml/5ml

1487/4797

20588ES25/20588ES60

Anti-V5 Affinity Gel Anti-V5标签亲和纯化凝胶)

25ml/100ml

20987/76187

20589ES03/20589ES08

Anti-His Affinity Gel Anti-His标签亲和纯化凝胶)

1ml/5ml

1487/4797

20589ES25/20589ES60

Anti-His Affinity Gel Anti-His标签亲和纯化凝胶)

25ml/100ml

20987/76187

3 标签多肽

蛋白标签是指利用DNA体外重组技术,与目的蛋白一起融合表达的一种多肽或者蛋白,以便于目的蛋白的表达、检测、示踪和纯化等。Yeasen公司推出的标签多肽可用于与带有相应标签的蛋白竞争性结合anti-标签单抗,以达到纯化标签融合蛋白的目的。

货号

名称

规格

价格(元)

20571ES11/20571ES25

3X Flag-tag Peptide 3X Flag-tag重复多肽)

4mg/25mg

2157/9537

20572ES11/20572ES25

Flag-tag Peptide Flag-tag多肽)

4mg/25mg

1237/5587

20573ES08/20573ES25

c-Myc Tag Peptidec-Myc Tag多肽)

5mg/25mg

1237/5587

20574ES08/20574ES25

HA Tag PeptideHA Tag多肽)

5mg/25mg

1237/5587

20575ES08/20575ES25

V5 Tag PeptideV5 Tag多肽)

5mg/25mg

1237/5587

20576ES08/20576ES25

6X His Tag Peptide6X His Tag多肽)

5mg/25mg

2557/11837

20577ES08/20577ES25

S-Tag (Pancreatic RNase A derivtive) PeptideS-Tag 多肽)

5mg/25mg

2557/11837

20578ES08/20578ES25

T7 Tag PeptideT7 Tag多肽)

5mg/25mg

2557/11837

20579ES08/20579ES25

VSV-G Tag PeptideVSV-G Tag多肽)

5mg/25mg

2157/9537

20580ES08/20580ES25

X-press Tag PeptideX-press Tag多肽)

5mg/25mg

2157/9537

HB200525



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