【用exo方法】非洲猪瘟病毒实时荧光重组酶聚合酶扩增技术(RPA)检测方法的建立

来源: 苏州达麦迪生物医学科技有限公司   2020-4-1   访问量:602评论(0)

非洲猪瘟(African swine fever,ASF)是由非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)感染引起的一种急性、热性、高度接触性传染病,给养猪业造成了严重的经济损失.本研究利用重组酶聚合酶扩增技术(RPA),针对ASFV B646L(p72)基因设计了3组引物和探针,并进行筛选、反应条件优化、灵敏性、特异性和重复性试验,建立了实时荧光RPA方法.结果显示,该方法在39℃、20 min内即可检测10个拷贝的DNA分子,且与猪瘟病毒、猪圆环病毒2型、猪细小病毒、猪伪狂犬病病毒均无交叉反应,检测5.5×106至5.5×100拷贝/μL共7个稀释度样品在各时间点的荧光强度,变异系数范围在0.38%~28.30%.该等温、快速扩增方法可用于ASFV的定性检测,为中国ASFV感染的早期诊断提供技术支持,对疫情暴发后相应控制方案的制定具有重要意义.

一种简便高准确率的检测技术

2014年6月9 讯 /生物谷BIOON/ --近日,刊登在国际杂志Analytical Chemistry上的一篇研究报告中,来自美国莱斯大学的科学家通过研究开发了一种简便高准确率的检测技术,来检测患者机体中的HIV迹象及病情发展程度。

研究者Rebecca Richards-Kortum表示,当前用于诊断婴儿HIV状况的金标准就是依赖实验室设备及当前可用的检测技术来对其机体中的病毒载量进行监测,而本文中研究者则开发出了基于核酸的新型HIV检测技术。

这项新型的检测技术基于PCR的方法对重组聚合酶进行放大(RPA),从而取代了复杂的实验室检测步骤,其可以对血液中的遗传标记物进行快速多重放大,从而使得病毒的遗传标记物可以很容易被检测到;利用qRPA检测就可以对HIV DNA中的特殊序列进行荧光探针的靶向标记,从而使用机器进行定量检测,最后通过对荧光DNA进行软件分析就可以使得医生们掌握HIV在患者机体中的动态信息。

用HIV序列的相同引物进行扩增

Rohrman教授说道,我们可以通过放大内部阳性对照对测试进行校准,而且可以利用HIV序列的相同引物进行扩增,因此检测实验可以正常进行;这项新型技术可以帮助追踪老年患者机体中的病毒载量,这对于临床医生们实时监测病人体内的HIV情况,从而来确定患者是否需要及时治疗提供了一定的参考数据。

从临床角度来讲,基于DNA的HIV检测可以在四个数量级上对HIV的病毒载量进行定量检测,尽管当前研究者使用热循环仪来进行检测,但是研究者正在着力开发一种新型的检测技术,使得整个操作步骤维持在室温和体温之间,从而确保实验的通用性和准确性。

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RPA恒温扩增技术发表的论文

1. https://www.nature.com/articles/s41598-018-35636-5

Development of real-time reverse transcription recombinase polymerase amplification (RPA) for rapid detection of peste des petits ruminants virus in clinical samples and its comparison with real-time PCR test 实时反转录重组酶聚合酶扩增技术(RPA)的研究进展

2. https://brill.com/view/journals/nemy/21/3/article-p243_2.xml

Recombinase polymerase amplification assay for rapid detection of the root-knot nematode Meloidogyne enterolobii重组酶聚合酶扩增法RPA快速检测

3. http://www.chvm.net/EN/abstract/abstract7141.shtml

›› 2017, Vol. 44 ›› Issue (11): 3270-3277.doi: 10.16431/j.cnki.1671-7236.2017.11.023

Establishment of a Real-time Fluorescent Recombinase Polymerase Amplification (RPA) for the Detection of African Swine Fever Virus非洲猪瘟病毒实时荧光重组酶聚合酶扩增技术(RPA)检测方法的建立

HADENG Chu-riya1,2, FAN Xiao-xu1, ZHAO Yong-gang1, WANG Shu-juan1, ZHANG Zhi-cheng1, GE Sheng-qiang1, LI Lin1, WU Xiao-dong1, WANG Zhi-liang1

1. National Research Center for Exotic Animal Disease, China Animal Health and Epidemiology Center, Qingdao 266032, China;2. College of Veterinary Medicine, Inner Mongolia Agricultural University, Hohhot 010018, China

4.https://journals.plos.org/plosone/articleid=10.1371/journal.pone.0166903

Recombinase Polymerase Amplification Assay—A Simple, Fast and Cost-Effective Alternative to Real Time PCR for Specific Detection of Feline Herpesvirus-1 重组酶聚合酶扩增法(RPA)-一种简便、快速、经济的猫疱疹病毒-1特异性检测方法

· Jianchang Wang,

· Libing Liu,

· Jinfeng Wang,

· Xiaoxia Sun,

Wanzhe Yuan

5. https://pubs.acs.org/doi/abs/10.1021/ac5011298

Quantification of HIV-1 DNA Using Real-Time Recombinase Polymerase Amplification 监测HIV的新型移动DNA检测技术(RPA技术)

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