即用型培养基的配制和灭菌操作步骤：

以1000ml“MS 3.0mg/lNAA 0.5%（即5g/l）琼脂 3%（即30g/l）蔗糖”为例。

第一步：准备好配制培养基的一切用具和试剂。

第二步：称量5g琼脂和30g蔗糖，溶解在大约所要配制培养基2/3~3/4左右体积（约600~750ml）的（蒸馏）水中，加热溶解，不时搅拌，避免出现琼脂生块和泡沫。

第三步：Bacto marine broth (difco 2216)根据用量，用量简或移液管从母液中取出所需量的大量元素、微量元素、铁盐、有机物质、激素（每做1000ml培养基，取20ml大量成分、20ml氯化钙母液、10ml微量成分、10ml铁盐母液和10ml有机成分，以及3.0mgNAA），放入预先有少量蒸馏水的烧杯中（以免加药液时溅出），然后加入琼脂和糖水溶液中搅拌混匀。

第四步：加水定容。待搅拌均匀后，用数滴稀碱（NaOH）将pH值调节到预定水平（一般为pH5.8），当pH值偏碱时用稀酸（HCl）调节。用pH试纸或酸碱指示（或pH）计测定培养基的pH值。

第五步：将Bacto marine broth (difco 2216)用漏斗分装到培养容器中。每瓶加15~20ml左右，之后加盖。

第六步：即用型培养基进行灭菌。高压蒸气灭菌锅的温度为121℃，灭菌15~20分钟。培养基常用高温高压（1.06kg/cm2或0.1MPa，121℃）蒸气灭菌的方法，灭菌时间应根据培养瓶体积大小及其内培养基容量多少而定。体积和容量越大，所需灭菌时间就越长。空试管、空三角瓶和滤纸要在130℃下灭30分钟或121℃灭60分钟。空的培养容器不应同盛装培养基的培养容器一起高压蒸气灭菌，不同体积培养容器或盛装不同容量的培养基也不能一起高压蒸气灭菌，而应该分别进行。因为热穿透力是一个需要考虑的因素，体积大的培养容器需要较长的时间灭菌，是因为热量穿透大体积培养基要比体积小的花更多的时间。

Bacto marine broth (difco 2216)相关培养基汇总：XY3501 快速植物DNA提取扩增套装 50次/100次/200次

XY1701 TUREscript H Minus M-MuLV Reverse Transcriptase(反转录酶) 5000U/10000U/10000U×5

XY4301 THERMOscript H Minus M-MuLV RTase(耐热反转录酶) 5000U/10000U

XY1801 TUREscript 1st Strand cDNA (第一链反转录试剂盒) 25次/50次

XY4401 THERMOscript 1st Strand cDNA Synthesis Kit(第一链耐热反转录试剂盒) 25次/50次

XY3401 TUREscript One Step RT-PCR Kit(一步法反转录PCR试剂盒) 50次×50μl/100次×50μl

XY4501 THERMOscript One Step RT-PCR Kit(一步法耐热反转录PCR试剂盒) 50次×50μl/100次×50μl

XY4801 miRNA cDNA 第一链合成试剂盒 25次

XY4901 miRNA 荧光定量PCR检测试剂盒 50次×50μl

XY2001 长片段PCR扩增试剂盒 100次/500次

XY2101 高保真PCR扩增试剂盒 100次/500次

XY0101 pSURE-T 载体连接试剂盒 20次/60次/20次(带T4ligase)/60次(带T4ligase)

XY0201 pSURE -T Simple 载体连接试剂盒 20次/60次/20次(带T4ligase)/60次(带T4ligase)

XY0301 pGEMX -T Easy 载体连接试剂盒 20次/60次/20次(带T4ligase)/60次(带T4ligase)

XY0401 pBLUE-T 载体连接试剂盒 20次/60次/20次(带T4ligase)/60次(带T4ligase)

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