T4 RNA 连接酶 2（截短型 ）

产品及特点

T4 RNA 连接酶2（截短型），又称T4 RNL2截短型，可特异性地将DNA 或RNA 的预腺苷酰化 5´末端连接到 RNA 3´末端。该酶连接时不需要 ATP ，但需要预腺苷酰化底物。该酶的表达来自 E. coli质粒，该质粒编码T4 RNA连接酶 2 基因的前249 个氨基酸。与全长的 T4 RNA 连接酶 2不同，T4 RNL2截短型不能将底物的 5´末端腺苷酰化，因此无法将RNA 或DNA的 5´ 磷酸末端连接到 RNA 3´ 端。该酶，可用于microRNA克隆中接头连接的优化，因为此酶只能利用腺苷酰化的引物，因此，可以降低连接背景。其结构式如下图：

1. 将 5 预腺苷化的 DNA 或 RNA 连接到任何 RNA 3 末端

2. 将单链腺苷化引物连接至小 RNA 上，用于 cDNA 克隆文库构建

3. 将单链腺苷化引物连接至 RNA 上，用于链特异 cDNA 文库构建

4. 无单链和双链 DNA 核酸外切酶、核酸内切酶、RNase 以及磷酸酶的污染。

反应条件

1X T4 RNA 连接酶反应缓冲液 [50 mM Tris-HCl (pH 7.5 @ 25℃) ，10 mMMgCl2，1 mM DTT]，25℃ 温育。

随酶提供试剂

单位定义

200 单位指 10 μl 反应体系中，25℃ 条件下，1 小时将 80% 的 31-mer RNA连接到预腺苷化 17-mer DNA 末端 [通用 miRNA 克隆接头] 所需的酶量。5´-FAM- rArGrUrCrGrUrArGrCrCrUrUrUrArUrCrCrGrArGrArUrUrCrArGrCrArArUrA-3´5´-rAppCTGTAGGCACCATCAAT–NH2-3´

Buffer成分

10 mM Tris-HCl，100 mM NaCl，0.1 mM DTT，0.1 mM EDTA，50%Glycerol，pH 7.5 @ 25℃

热失活

65℃ 加热 20 分钟。