产品内容： 
提取液：100mL×1 瓶，4℃保存； 
试剂一：粉剂×1 瓶，-20℃保存； 
试剂二：液体 20mL×1 瓶，4℃保存； 
试剂三：液体×1 支，4℃保存；
 
产品说明：
GAPDH 催化3-磷酸甘油醛氧化生成1,3-二磷酸甘油酸，是糖酵解途径的关键酶，与糖异生途径、体内血糖浓度的维持和糖尿病的发生密切相关，在机体糖、脂、蛋白代谢紊乱疾病中发挥重要作用。
3-磷酸甘油酸激酶催化三磷酸甘油酸和ATP 生成1,3 二磷酸甘油酸。GAPDH 逆向催化1,3二磷酸甘油酸和NADH 生成3 磷酸甘油醛、无机磷和NAD，340nm 处测定NADH 的减少量可反映GADPH 活性的高低。
需自备的仪器和用品
分光光度计/酶标仪、恒温水浴锅、台式离心机、可调式移液器、微量石英比色皿/96孔板、 研钵、冰和蒸馏水。
操作步骤：
样本的前处理
1、细菌或培养细胞：
先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量（10 4 个）：提取液体积（mL）为500~1000：1的比例（建议500万细菌或细胞加入1mL提取液）， 超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率 20％或200W，超声3s，间隔10s，重复30次）；8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。 
2、组织：
按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加 入1mL提取液），进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。 
 
测定步骤 
1、分光光度计或酶标仪预热30min以上，调节波长至340nm，蒸馏水调零。 2、样本测定 
（1）工作液的配制：将试剂二全部倒入试剂一瓶中，充分溶解，37℃(哺乳动物)或 25℃(其 它物种)预热10分钟；现配现用。 
（2）在试剂三中加入500μL蒸馏水，充分混匀待用；用不完的试剂 4℃保存一周。 
（3）在微量石英比色皿或96孔板中加入5μL 样本、5μL试剂三和190μL工作液，混匀，加入 最后一个试剂的同时开始计时，记录340nm处20s时的吸光值A1和5min20s后的吸光值A2， 计算 ΔA=A1-A2。 
 
GAPDH 活性计算 
a. 用微量石英比色皿测定的计算公式如下 
（1）按样本蛋白浓度计算 
单位的定义：每mg组织蛋白每分钟消耗1nmol的NADH定义为一个酶活力单位。 
GAPDH（nmol/min/mg prot）＝[ΔA×V 反总÷（ε×d）×10 9]÷(V 样×Cpr) ÷T =1286×ΔA÷Cpr 
（2）按样本鲜重计算 
单位的定义：每g组织每分钟消耗1nmol的NADH定义为一个酶活力单位。 GAPDH（nmol/min/g 鲜重）＝[ΔA×V 反总÷（ε×d）×10 9]÷(W×V样÷V样总) ÷T =1286×ΔA÷W 
（3）按细菌或细胞密度计算 
单位的定义：每1万个细菌或细胞每分钟消耗1nmol的NADH定义为一个酶活力单位。 
GAPDH（nmol/min/10 4cell）＝[ΔA×V反总÷（ε×d）×10 9]÷(500×V样÷V样总) ÷T =2.57×ΔA V 反总：反应体系总体积，2×10 -4 L；
ε：NADH摩尔消光系数，6.22×10 3 L/mol/cm；d：比 色皿光径，1cm；V 样：加入样本体积，0.005 mL；V 样总：加入提取液体积，1mL；T：反应 时间，5 min；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量，g；500：细菌或细胞总数，500 万。 
 
b. 用96孔板测定的计算公式如下 
（1）按样本蛋白浓度计算 
单位的定义：每mg组织蛋白每分钟消耗1nmol的NADH定义为一个酶活力单位。 
GAPDH（nmol/min/mg prot）＝[ΔA×V 反总÷（ε×d）×10 9]÷(V 样×Cpr) ÷T =2572×ΔA÷Cpr 
（2）按样本鲜重计算 
单位的定义：每g组织每分钟消耗1nmol的NADH定义为一个酶活力单位。 GAPDH（nmol/min/g 鲜重）＝[ΔA×V反总÷（ε×d）×10 9]÷(W ×V样÷V样总) ÷T =2572×ΔA÷W 
（3）按细菌或细胞密度计算 
单位的定义：每1万个细菌或细胞每分钟消耗1nmol的NADH定义为一个酶活力单位。 
GAPDH（nmol/min/10 4cell）＝[ΔA×V反总÷（ε×d）×10 9]÷(500×V样÷V样总) ÷ T=5.144×ΔA V 反总：反应体系总体积，2×10 -4 L；
ε：NADH 摩尔消光系数，6.22×10 3 L/mol/cm；d：96 孔板光径，0.5cm；V 样：加入样本体积，0.005 mL；V 样总：加入提取液体积，1mL；T：反 应时间，5 min；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量，g；500：细菌或细胞总数，500 万。