结合珠蛋白（Haptoglobin，HP）,分子量100,000，是急性时相反应蛋白之一，在许多病理情况下Hp可发生改变，含量减少时可见于溶血性疾病、肝硬化、原发性肝癌等；含量增高可见于感染、炎症、肿瘤。特别是在反映溶血性疾病方面，它是一项诊断的可靠的指标。本法可用于检测正常人血清、体液中HP水平。								
   
      
      
      
      
      
      
      

用兔抗HP的多克隆抗体包被成固相酶标板，以识别结合待测标本中的HP，用同株抗体标记生物素（Bio-Ab），用亲和素标记辣根酶(HRP-A)，向固相酶标板中加入标准品或待测品，反应、洗涤后，加入Bio-Ab，反应、洗涤后，加入HRP-A反应、洗涤后，酶标板上形成Ab-Ag-Ab-Bio-A-HRP复合物，加酶底物显色，用酶标仪在相应波长下测定光密度（OD值），根据标准曲线，计算出待测标本中的HP含量。

试剂盒组成

1.       真空包装96孔固相酶标板一块。

冻干的标准品6瓶：分别用标准稀释液1mL溶解，浓度为0、10、30、90、180、270ng/mL 。

2.       生物素化抗体（Bio-Ab）1瓶：10mL。

酶稀释液 1 瓶：10mL

3.       酶结合物1管：20µl，用前每µl加酶稀释液1mL稀释为酶工作液。

4.       显色液：A为冻干品：2瓶，B为液体：2瓶。 临用前1瓶A加1瓶B溶解。

5.       终止液1瓶：5mL。

6.       洗涤液1瓶：用前用蒸馏水20倍稀释。

7.       实验缓冲液1瓶：10 mL.

注意事项

1 操作    ⑴为保证实验结果的准确性，标准品必须做双孔；条件允许的情况下标准、质控、样品均应做双孔。 ⑵为防止样品蒸发，试验时应将反应板铺于有湿布的密闭盒内。⑶血清、枸橼酸盐或EDTA抗凝血浆均可检测，但血清或血浆中残存凝块或红细胞须经离心去除。⑷标本在2-8℃可贮存3天，超过3天应放入-20℃，避免反复冻融。 ⑸分别用加样器头吸取每份标本，避免相互交叉。⑹因底物易于氧化且对光敏感，因此一定要用前配置，用后的底物液必须弃去，不可再用。⑺显色时室温应在20-25℃。

2 试剂盒储存条件    ⑴除酶结合物存于-20℃外其余试剂均储存于4℃。⑵酶标板在真空条件下可存放6个月，打开后如果不能一次用完，请装于密封性好的袋子内，于4℃干燥处保存，并在一个星期内使用。⑶标准品溶解后于4℃保存可使用一个月。⑷Bio-Ag、HRP-A每次吸取时应尽量避免污染，4℃保存可使用6个月。若液体出现浑浊则活性不可再用。

样品准备

取静脉血分离血清，如不立即测量，可将样本密封后，置于2~8℃或-20℃储存备测，2~8℃保存不应超过48小时，-20℃保存不超过2个月。血清或血浆样品实验前用缓冲液做1:100倍稀释。

操作步骤

1. ELISA测定HP操作步骤见下表：  加样量（µl）

操作完后用酶联仪在490nm波长测量各孔OD值。

2 计算 ⑴用酶标仪上的ELISA自动分析软件对所测OD值进行处理，选双对数法绘制曲线，直接得出样品浓度。⑵以标准物浓度为横坐标（对数坐标），OD值为纵坐标（对数坐标），在对数坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的OD值由标准曲线查出相应浓度。

本试剂盒的技术参数

1 灵敏度：本测定法灵敏度为5ng/mL。

2 精密度：用本法同时及不同时间检测8份样品，批内变异系数8.5，批间变异系数为13.4。

3 准确度：⑴该抗血清与酸性糖蛋白（500μg/mL）、CRP（10 μg /mL）、a 1-AT（81 μg /mL）均无交叉反应。⑵向已知浓度血清中加入定量的HP抗原测定回收率，其低浓度回收率为95.2 , 高浓度回收率为104.3 。

正常参考值

正常献血员血清样品50份测得正常参考值：20-160µg/mL。

建议各实验室应根据条件建立自己的正常对照组。