大肠杆菌Origami B（DE3)菌种的来源、传代、分离复壮、使用和鉴定等均应该做好详细记录。包括菌种时间、名称、菌号、代数、保存方式、分离复壮方式、使用内容、鉴定情况等。

菌种保藏由于影响因素过多，细胞/组织培养中出现的一些问题往往很难分析并得到解决，因此被人戏称为“黑色艺术”或“巫术”。本文列举了一些动物细胞/组织培养中常见的问题及解决方法。      

1. 大肠杆菌Origami B（DE3)菌种培养试剂的保存：

   血清：-5oC - -20oC 保存，避免反复冻融。

   培养基:  2oC – 8oC避光保存。

   完全培养基: 2oC – 8oC避光保存，并在2周内用完。

   尽量缩短血清和培养基见光的时间

 2.液体培养基中谷氨酰胺使用方法：

很多细胞生长要求在培养液中添加谷氨酰胺。谷氨酰胺在溶液中很不稳定，应置于-20◦C冰冻保存，用前加入培养基中。加有谷氨酰胺的液体培养基4◦C 冰箱储存两周以上时，应重新加入原来量的谷氨酰胺。大肠杆菌Origami B（DE3)菌种另一种选择是使用L-谷氨酰胺的衍生物 - L-alanyl-L-glutamine dipeptide（如GenDepot的产品Glutaplex配方中含有的成分之一） 替代L-谷氨酰胺。Glutaplex与L-谷氨酰胺相比更加稳定，降解比较慢，提高细胞的存活和生长，极大降低对细胞有毒性的氨的积累。

3.培养基中是否应加酚红：

 大肠杆菌Origami B（DE3)菌种酚红在培养基中被用来作为pH值的指示剂，中性时为红色，酸性时为黄色，碱性时紫色。研究表明，酚红可以模拟固醇类激素的作用，特别是雌激素。为避免固醇类反应，培养细胞尤其是哺乳类细胞时，应使用不加酚红的培养基。由于酚红干扰检测，一些研究人员在做流式细胞检测时不使用加酚红的培养基。EC1011 GT38 人胃癌细胞 人 1640 贴壁

EC1012 GT39 人胃癌细胞 人 1640 贴壁

EC1013 HECerEpiEC 人正常子宫颈上皮细胞 人

EC1014 REC92A 人前列腺干细胞 人 IMDM 贴壁

EC1015 SLK 卡波西肉瘤细胞 人 DMEM 贴壁

EC1016 HMECB 人黑色素瘤细胞 人 DMEM 贴壁

EC1017 EAEC-E2G8 小鼠腹水瘤细胞 小鼠 IMDM 半贴壁

EC1018 IPEEC-1 猪小肠上皮细胞 猪 1640 贴壁

EC1020 HDF-a 成人真皮成纤维细胞 人

EC1021 HPEC-Y5 人胰腺细胞 人 DMEM 贴壁

EC1022 NEEC 人食管癌细胞 人 DMEM 贴壁

EC1023 OVSAHO 人卵巢癌细胞 人 DMEM 贴壁

EC1024 HMO6 人小胶质细胞 人 DMEM 贴壁

EC1025 SNU119 人卵巢癌细胞 人 1640 贴壁

EC1026 KM933 EB病毒转化的人B淋巴细胞 人 1640 悬浮

EC1027 AN3ECA 人子宫内膜腺癌(转移)细胞 人 EMEM 贴壁

EC1028 HA 人星形胶质细胞 人 DMEM 贴壁

EC1029 NECI-H2591 人肺癌细胞 人 1640 贴壁

EC1030 LM8 EC3H小鼠骨肉瘤细胞 小鼠 DMEM 贴壁

EC1031 MuM-2EC 人眼脉络黑色素瘤细胞 人 DMEM 贴壁

EC1032 L2 大鼠肺泡上皮细胞 大鼠

EC1033 3AO 人卵巢癌细胞 人 1640 贴壁

EC1034 hECMEECs 人心脏微血管内皮细胞 人

EC1035 F98 大鼠胶质瘤细胞 大鼠 DMEM 贴壁

EC1036 EECt1/E6E7 人宫颈永生化鳞状细胞 人 EMEM 贴壁

EC1037 Hs832.TEC 人卵巢良性肿瘤细胞 人 DMEM 贴壁