产品内容：
提取液：液体100mL×1 瓶，4℃保存；
试剂一：液体5mL×1 瓶， 4℃保存；
试剂二：液体25mL×1 瓶， 4℃保存。
丙酮酸钠标准液，1mg/ml：液体1mL×1瓶， 4℃保存
产品说明：
丙酮酸通过乙酰CoA 连接葡萄糖、脂肪酸和氨基酸三大代谢，起着重要的枢纽作用。
丙酮酸与2,4-二**苯肼作用，生成丙酮酸-2,4-二**苯腙，在碱性溶液中呈樱红色。
需自备的仪器和用品：
可见分光光度计/酶标仪、台式离心机、可调式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研钵、冰、蒸馏水。
操作步骤：
一、 丙酮酸提取：
1、 细菌或培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量（104 个）：提取液体积（mL）为500~1000：1 的比例（建议500 万细菌或细胞加入1mL 提取液），超声波破碎（冰浴，功率20％或200W，超声3s，间隔10s，重复30 次），静置30min，8000g，常温离心10min，取上清待测。
2、 组织：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为1：5~10 的比例（建议称取约0.1g 组织，加入1mL 提取液），进行冰浴匀浆，静置30min，8000g，常温离心10min，取上清待测。
3、 血清（浆）样品：按照血清（浆）体积（mL）：提取液体积(mL)为1：5~10 的比例（建议取0.1mL 血清（浆）加入1mL 提取液），进行冰浴匀浆，静置30min，8000g，常温离心10min，取上清待测。
4、 标准品的准备：将标准品用蒸馏水稀释至100、50、25、12.5、6.25、3.125、1.5625、0mg/ml。
二、 测定步骤：
1、 分光光度计预热30min 以上，调节波长至520nm，蒸馏水调零。
2、 在微量石英比色皿或96孔板中加入75mL标准液或样本和25mL试剂一，混匀，静置2min，加入125mL试剂二，混匀，于520nm波长处测定吸光值A。
三、 丙酮酸含量计算：
1、 根据标准品浓度和测定值建立标准曲线；y为丙酮酸钠含量（μg/mL），x为吸光值。
2、 按照血清（浆）体积计算
丙酮酸含量（μg/mL）= (y×V1)÷（V3×V1÷V2）=y×10
3、 按照蛋白浓度计算
丙酮酸含量（μg/mg prot）=(y×V1)÷(V1×Cpr)=y ÷Cpr
4、 按照样品质量计算
丙酮酸含量（μg/g 鲜重）= (y×V1)÷(W ×V1÷V2）=y÷W
5、 按照细菌或细胞密度计算
丙酮酸含量（μg/104 cell）＝(y×V1)÷
V1：加入反应体系中样本体积，0.075mL；V2：加入提取液体积，1 mL；V3：加入血清（浆）体积，0.1 mL；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量，g；500：细菌或细胞总数，500 万。
 相关文献：
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