常规转染技术可分为两大类，一类是瞬时转染，一类是稳定转染（永久转染）。前者外源DNA/RNA不整合到宿主染色体中、虽然可以达到高水平的表达，但通常只持续几天。在转染后24-72小时内（依赖于各种不同的构建）分析结果，常常用到一些报告系统如荧光蛋白，β-半乳糖苷酶等来帮助检测。后者也称稳定转染，外源质粒DNA整合到宿主细胞染色体上，使宿主细胞可长期表达目的基因及蛋白。需要在瞬时转染基础上对靶细胞进行筛选或者应用高转染效率的病毒。建立稳定的细胞系，是对靶细胞进行筛选，根据不同基因载体中所含有的抗性标志选用相应的药物，最常用的真核表达基因载体的标志物有潮霉素（hygromycin）和新霉素（neomycin），常用G418进行选择性筛选。筛选得到的细胞可稳定表达目的蛋白，可以用于蛋白的扩增和富集，或者得到稳定沉默特定基因的细胞株。

生博提供：载体构建服务，也可以针对构建好的外源质粒DNA进行稳定筛选。针对质粒DNA的抗性标志，选择相应的药物，并对所需筛选的细胞进行药物测试，选择细胞全部凋亡时药物的最低浓度。瞬时转染后，在该浓度条件下进行筛选。10-14天后，挑取单克隆，扩增后通过RT-PCR检测mRNA表达情况或客户提供靶基因特异性抗体，生博提供Western Blot检测，根据蛋白表达情况，进一步筛选出稳定细胞株。

服务流程图

实验流程图

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实验结果

      稳定细胞株构建成功后，通过RT-PCR或 Western Blot鉴定筛选结果。被筛选出的稳定细胞株可以持续性表达目的基因或蛋白。同时可以根据要求为客户提供RT-PCR结果或Western Blot结果。

部分带有绿色荧光的稳定株

报价与周期

参考文献

[1]  Grez M, Akgün E, Hilberg F, Ostertag W. Proc Natl Acad Sci. 1990 Dec;87(23): 9202- 9206.
[2]  Poeschla E, Corbeau P, Wong-Staal F. Proc Natl Acad Sci. 1996 Oct 5;93(21):11395- 11399.

相关产品

[1]  G418 Gibco Cat. No.11811
[2]  High-Capacity cDNA Reverse Transcription Kits  Cat.No.4368813
[3]  SunBio Trans-EZ 常见细胞系转染试剂Cat.No.STP07006
[4]  Lipofectamine™ 2000 transfection reagent Invitrogen Cat. No.11668-019