重组腺病毒（Adenovirus）：是当前最高效最可靠的重组病毒，常用于哺乳动物细胞瞬时、高水平表达基因。

特点：

1. 宿主范围广：可感染大鼠、小鼠、兔、猪、羊、猴、鸡等物种。

2. 可感染增殖细胞和非增殖细胞。
3. 瞬时 高效表达，不整合到宿主基因组中。
4. 病毒滴度高，可用于动物实验。

病毒构建步骤及周期：

1. 将目的基因 插入 穿梭质粒：          15工作日，  4000RMB

2. 穿梭质粒，腺病毒载体共转染293细胞：30个工作日, 6000RMB

3. 腺病毒包装，鉴定，出毒，扩增、纯化：   30个工作日, 18000RMB

4. 鉴定重组的腺病毒，滴度测定：       10工作日,  6000RMB

（PCR检测基因，对病毒上清进行无菌实验。）

病毒包装程序：

以6孔板为例，每孔需 10的6次方个 293  FT细胞。

1.取1.5ml EP管，加入1.5μg包装混合质粒，250μl无血清Opti MEM，轻柔混匀，室温孵育5min。

2.取1.5ml EP管，取9μl 脂质体2000溶于250μl无血清Opti-MEM I培养基中，轻柔混匀，室温孵育5min。

3.将DNA溶液和脂质体溶液轻柔混匀，室温孵育20min

4.用胰酶消化并记数293FT细胞，用含血清的DMEM培养基重悬细胞。

5.在6孔板中每孔加入1ml含血清的生长培养基，再加入DNA-脂质体复合。

6.将1ml重悬的293FT细胞铺到到平板中，37℃ CO2孵箱中孵育过夜。

7.吸除含有DNA-脂质体复合物的培养基，用DMEM换液。

8.转染后48-72h收获含病毒的上清。3000 rpm 离心20min，去除沉淀。

9.病毒上清-80°C贮存。