Dynal磁珠-微生物分离

1.Dynal磁珠简介

1979年，John Ugelstad教授和他的同事发明了一种生产大小一致的多聚体微球技术。通过此项技术，他们生产出了直径在μm级结构对称的多聚体微球。而在此之前，美国航天航空局的专家们认为只有在无重力的情况才能达到。

这项技术的发明对生物分子的分离纯化来说，是一场革命性的创新。针对微生物领域，Dynal 在磁珠表面偶联了可以与细菌或原生动物结合的抗体。现在这种采用复合顺磁物质制成的小球被命名为Dynabead，而这种免疫磁性分离技术称为IMS（Immunomagnetic Separation）。

2.应用于微生物分离的Dynal磁珠

Dynal Biotech 微生物分选类产品可以利用磁性分选技术从环境、临床和食品样品中富集细菌、诸虫。微生物的分离常常被称为大海捞针，IMS为您提供高灵敏性、快速有效的富集分离方法。传统方法在分离微生物时的弊端，磁性分选技术都能有效避免。

目前，Dynabeads®产品已经得到美国环保局和AOAC的认证。Dynabeads®能够从预富集样品中富集微生物，IMS富集方法减少了背景的干扰提高了精准性。

3.市场

Dynal 的微生物市场非常之大，每年创造数十亿美元的销售额。具体而言，可划分为几个部分：临床检验；食品检验；水质／环境检验；兽药检验。每个领域里，都有许多常规需要检测的微生物，有些通过常规方法就能很容易的检测到，而有些微生物传统的方法很难有效富集分离。

4.代表产品-大肠杆菌O157分选磁珠

E.coli 0157是VTEC大肠杆菌群最常见的一类菌群。VTEC是指产vero细胞毒素大肠杆菌(Verocytotoxic Escherichia coli).这种毒素是引起出血性尿毒症最主要的原因，也能引起儿童肾衰竭，死亡率达10。多年来，一直认为这种疾病感染的诱因是牛奶和牛肉的制品，但这种菌群的分离富集一直都很难有理想的办法来解决。Dynabeads® anti-E.coli 0157可以从各种食品样品中分离富集E.coli 0157，满足流行病学的研究要求和提高控制力度。现在这种磁性分选的方法已经被英国公共健康服务实验室认定为标准的分离方法，在水质检测和牛奶制品的菌群检测方面也作为标准方法来采用。

IMS方法是专门用来从各种样品中分离细菌和原生动物的磁性分离方法。对于微生物样品来说，Dynal Biotech 提供了一系列的产品，有已包被好了高亲和力的抗体的即用型磁珠，可以直接用来分离活菌或原生动物。如果靶目标是Dynabeads®产品线里没有提供的，您也可以自己包被抗体来分选您想要的微生物。

5.优点

l   Dynabeads^®已经预包被了高亲和力的抗体，可以与细菌表面标记物结合。

l   培养后快速获得结果。

l   Cleaner plates 。

l   富集细菌整个过程用时不超过1小时。

l   分选结果的灵敏性大大提高。

l   1天可完成多个样品的检测。

l   选用BeadretreiverTM 可以提高细菌分选的自动化程度。

6.Dynal 磁珠产品技术要点

l   IMS分选试剂的储藏温度应该是2-8℃。过低或过高的温度都会影响有效期，从而影响产品的使用效果。

l   所有的试剂和样本在使用之前都应该平衡到室温（15-25℃）。

l   全部操作都应该在试验台上，室温（15-25℃）下进行。

l   手动处理样本要求比较高的试验室操作技术和细心的操作。用BeadRetriever时，将样本转移至试管的操作应该在距离已经准备好的样本至少1米的区域进行。

l   磁珠使用前必须震荡混匀

l   在处理极其粘稠或是含脂量很高的样本时,可以用到稀释。推荐使用特定的洗涤缓冲液（PBS-Tween）来稀释样本。

l   使用360°旋转混合器来孵育磁珠。建议从头到底的旋转。

l   在室温下保持10分钟孵育时间。过多的孵育对靶细胞或靶分子的复原能力仅有轻微的提升，但却增大了非特异性结合的可能性。

l   根据所用的离心管的类型，将MPC^®-S磁条摆放在合适的位置。MPC^®-S磁盘有两种不同的位置。圆底或是圆锥形离心管可大量处理样本并用在垂直位置。圆锥形离心管仅用在倾斜位置，适用于处理少量样本。

l   洗涤要彻底，而且要按照规定的次数进行。

l   轻微的混匀液体，而不是震荡摇匀。在加磁场之前，要确保磁珠适当的加到了溶液里。

l   当把磁珠集中在一个小球里的时候，用90°的rock-n-roll动作在特定的时间内对每个旋转进行, , 1/2的操作。

l   小心的去处悬浮液。手工将液体吸出试管而不能空吸。从样本试管吸出磁珠后，因为这些液体要丢弃，所以会引起靶细胞或是靶分子的缺失。

l   额外的洗涤步骤可以减少背景干扰，但也会降低靶细胞的回收效率。

l   如果考虑到背景污染，可以在每次洗涤步骤后更换离心管。很多微生物都可以粘到管壁上，更换可以减少这种交叉污染。

7.磁珠

（1）直接用来分选微生物的磁珠