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其方法是将10mg HRP溶于0.2ml含1.25%戊二醛的PH 6.8 0.1mol/L PBS中，置室温18小时，充分透析或经葡聚糖凝胶G-25层析除去多余戊二醛，加生理盐水至1ml，然后加入5mg纯化的抗体球蛋白及0.1ml PH 9.6的1 mol/L碳酸盐缓冲液，混合后于4℃冰箱放置24小时，加入0.1ml 0.2 mol/L的赖氨酸溶液，室温置2小时，用PH 7.2、0.15 mol/L PBS充分透析，藉离心除去沉淀，上清即为酶结合物。必要时可作进一步纯化后使用。

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过碘酸钠氧化法：本法是目前酶标记抗体较好的方法，能使70%酶与90%以上球蛋白结合。采用本法首先是用氟代二**苯（Fluoro dinitro bengene 2.4—**苯，FDNB）封闭HRP表面的游离氨基（亦可用甲醛或戊二醛来封闭），从而提高酶结合抗体球蛋白的能力，避免酶的自身交联。然后用过碘酸钠来氧化HRP表面结构的醣链部份（即低聚醣基团）使成醛基，使其直接与抗体球蛋白上的游离氨基形成共价键而结合。最后用硼氢酸钠还原，使HRP表面醛基能充分与抗体球蛋白上氨基进行反应，使之形成稳定的结合物。

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