磷酸化蛋白提取试剂盒

中文名称：磷酸化蛋白提取试剂盒
英文名称：Phosphorylated protein extraction kit
产品规格：50T|100T
我司磷酸化蛋白提取试剂盒适用于从各种原代或传代细胞和各种实体组织，如脑、脊髓、神经结或纤维、脂肪、肝脏、消化道、肾脏、心脏、肌肉、血管、结缔组织等哺乳动物组织中提取磷酸化蛋白。提取过程简单方便，可在1小时内完成。该试剂盒含有的蛋白酶抑制剂混合物，阻止了蛋白酶对蛋白的降解，为提取高纯度的蛋白提供了保证。本试剂盒含有的独特配方能充分保护磷酸化蛋白的磷酸化，够溶解细胞膜包括细胞质膜和核膜。提取的蛋白可用于Western Blotting、蛋白质电泳、免疫共沉淀等下游蛋白研究。

储存条件：蛋白酶抑制剂-20℃保存；蛋白提取液2-8℃保存。
有效期：一年。

注意事项：
●本试剂盒仅供科学研究使用，不可用于诊断或治疗。
● 螺旋盖微量试剂管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖和管内壁上的液体离心至管底，避免开盖时试剂损失。
● 禁止与其他品牌的试剂混用，否则会影响使用效果。
● 最好使用一次性吸头、管、瓶或玻璃器皿，可重复使用的玻璃器皿必须在使用前清洗并彻底清除残留清洁剂。
● 避免皮肤或粘膜与试剂接触。
● 不论是细胞或组织样本，应充分保证蛋白样本的新鲜。组织离体后应当立即放到液氮中保存，长期保存的话最好也在液氮中(如果无液氮条件则放置-80℃)。
● 避免蛋白的反复冻融。
●电泳buffer中也可加入Na3VO4。
●本提取配方中含有蛋白激酶及磷酸酶这两种酶的抑制剂，因此不能用于蛋白激酶和磷酸酶这两种酶的免疫共沉淀实验。

产品特点：
1．使用方便，从细胞，组织中提取蛋白不需经过研磨、反复冻融、超声破碎等前处理。
2．将蛋白提取的时间缩短至 30分钟-1小时。
3．含蛋白稳定剂，提取的蛋白稳定。
4．紫外检测蛋白浓度时，背景干扰低。
5．蛋白酶抑制剂抑制了蛋白的降解，蛋白酶抑制剂配方优化。蛋白酶抑制剂混合物包含7种独立的蛋白酶抑制剂；每一种抑制剂可特异性抑制某一种或几种蛋白酶活性。
该混合物优化的组成使其可以抑制几乎所有重要的蛋白酶活性，包括丝氨酸蛋白酶、半胱氨酸酸蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶、丙氨酰-氨基肽酶等。

试剂盒以外自备试剂和仪器：
● 移液器、吸头 ●离心机及离心管
● 涡旋振荡器 ●冰箱，冰盒

使用方法：

使用注意事项：
● 旋帽离心管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体甩至管底，避免开盖时液体洒落。
● 实验过程中的所有试剂须预冷；所有器具须放-20℃冰箱预冷。整个过程须保持样品处于低温。
●蛋白酶抑制剂储存期间溶液如果出现沉淀，不影响使用，溶解后正常使用。
●可以根据自己实验需要加入其它蛋白酶抑制剂单品。
● Western 实验内参可以选用beta-actin、GAPDH、Tubμlin。
● 更多蛋白提取常见问题分析等资料可以联系本公司索取。
细胞磷酸化蛋白提取：
1．提取液制备：每500μl冷的蛋白提取液中加入2μl蛋白酶抑制剂混合物，混匀后置冰上备用。
2．取5-10×106个细胞①，在4℃，1000rpm条件下离心5-10分钟，小心吸取培养基，尽可能吸干，收集细胞。
3．用冷PBS洗涤细胞两次，每次洗涤后尽可能吸干上清。
4．每 5×106个细胞中加入500μl冷的蛋白提取液，混匀后，在4℃条件下振荡15-20分钟。
5.在 4℃，14000rpm条件下离心15分钟。
6．快速将上清吸入另一预冷的干净离心管，即可得到磷酸化蛋白。
7．将上述蛋白提取物定量②后分装于-80℃冰箱保存备用或直接用于下游实验③。
注：
①细胞数量根据实验情况调整，每次的裂解液用量并不是一定的，请根据实际情况调整。
② 建议用BCA法进行蛋白定量。
③蛋白样品－80℃存放一年没有问题。注意不要被蛋白酶水解掉，不要被细菌污染。
组织磷酸化蛋白提取：
1．提取液制备：每 500μl冷的蛋白提取液中加入2μl蛋白酶抑制剂混合物，混匀后置冰上备用。
2．取100mg组织样本剪碎，加入总蛋白提取液，用组织匀浆器匀浆至无明显肉眼可见固体①。
3．将组织匀浆吸入一预冷的干净离心管中，在4℃，10000rpm条件下离心5分钟。
4．将上清吸入另一预冷的干净离心管，即可得到磷酸化蛋白。
5．将上述蛋白提取物定量后分装于-80℃冰箱保存备用或直接用于下游实验。 

特别提示：本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！