组织线粒体/胞浆蛋白提取试剂盒

中文名称：组织线粒体/胞浆蛋白提取试剂盒
英文名称：Tissue mitochondrial / cytoplasmic protein extraction kit
产品规格：50T|100T
组织线粒体蛋白/胞浆蛋白提取试剂盒提供全套试剂，适用于从各种实体组织，如脑、脊髓、神经结或纤维、脂肪、肝脏、消化道、肾脏、心脏、肌肉、血管、结缔组织等哺乳动物组织中提取线粒体蛋白和胞浆蛋白。提取过程简单方便。制备的线粒体蛋白不仅纯度高，保持天然活性，而且绝少交叉污染。提取的蛋白可用于Western Blotting、转录活性分析、Gel shift凝胶阻滞实验、免疫共沉淀、酶活性测定等蛋白研究。
本试剂盒提取的蛋白不可用于2D电泳。如下游实验需要用于2D电泳，请使用货号的试剂盒。

储存条件：线粒体试剂AB于2-8℃保存，长期存放于-20℃保存；试剂C和试剂D室温保存；蛋白酶抑制剂-20℃保存。
有效期：一年。

注意事项：
●本试剂盒仅供科学研究使用，不可用于诊断或治疗。
● 螺旋盖微量试剂管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖和管内壁上的液体离心至管底，避免开盖时试剂损失。
● 禁止与其他品牌的试剂混用，否则会影响使用效果。
● 最好使用一次性吸头、管、瓶或玻璃器皿，可重复使用的玻璃器皿必须在使用前清洗并彻底清除残留清洁剂。
● 避免皮肤或粘膜与试剂接触。

产品特点：
1．使用方便，从组织中提取蛋白不需经过反复冻融、超声破碎等前处理。
2．将蛋白提取的时间缩短至 30分钟-1小时。
3．含蛋白稳定剂，提取的蛋白稳定。
4．紫外检测蛋白浓度时，背景干扰低。
5．蛋白酶抑制剂抑制了蛋白的降解，蛋白酶抑制剂配方优化。蛋白酶抑制剂混合物包含7种独立的蛋白酶抑制剂；每一种抑制剂可特异性抑制某一种或几种蛋白酶活性。
该混合物优化的组成使其可以抑制几乎所有重要的蛋白酶活性，包括丝氨酸蛋白酶、半胱氨酸酸蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶、丙氨酰-氨基肽酶等。

试剂盒以外自备试剂和仪器：
● 移液器、吸头 ●离心机及离心管● 涡旋振荡器 ●冰箱，冰盒

使用方法：

使用注意事项：
● 旋帽离心管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体甩至管底，避免开盖时液体洒落。
● 实验过程中的所有试剂须预冷；所有器具须放-20℃冰箱预冷。整个过程须保持样品处于低温。
●蛋白酶抑制剂储存期间溶液如果出现沉淀，不影响使用，溶解后正常使用。
●可以根据自己实验需要加入其它蛋白酶抑制剂单品。
● 最好使用 Dounce 匀浆器匀浆，如果没有Dounce 匀浆器，用普通1ml 玻璃匀浆器匀浆也可。也可采用超声破碎的方法，建议功率30w，10s。采用普通匀浆器或超声破碎，建议镜检，保证细胞80%以上的破碎率。

1．提取液准备：每200μl试剂C和试剂D中各加入1μl蛋白酶抑制剂混合物混匀备用。
2．取50mg组织样本剪碎。
3．加入 200μl冷的试剂A，置冰上10分钟。
4．Dounce 匀浆器匀浆30-40下，然后在4℃，500×g条件下离心5分钟。
5．快速将上清吸入另一预冷的干净离心管。
6．在 4℃，11000×g以上条件下离心20分钟。
7．取步骤6的上清于另一干净离心管中，加入200μl试剂C 混匀，在4℃，11000×g以上条件下离心5分钟，取上清，即得胞浆蛋白。
8.在步骤6的沉淀中加入200μl冷的试剂B，混匀。
9.在 4℃，11000×g以上条件下离心20分钟。
10．弃上清。
11.在沉淀中加入80μl-150μl试剂D，置冰上20分钟，每隔5分钟高速涡旋振荡15秒。
12．即得线粒体蛋白。
13．将上述蛋白提取物定量①后分装于-80℃冰箱保存备用或直接用于下游实验②。
【注】：
① 建议用BCA法进行蛋白定量。
②蛋白样品－80℃存放一年没有问题。注意不要被蛋白酶水解掉，不要被细菌污染。 

特别提示：本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！