产品内容： 
提取液：液体 60mL×1 瓶，4℃保存； 
试剂一：液体 60mL×1 瓶，4℃保存； 
试剂二：粉剂×4 瓶，4℃保存。
产品说明： 
XOD（EC1.17.3.2）催化黄嘌呤氧化生成尿酸和超氧阴离子，是活性氧主要来源之一；同时也是 核苷酸代谢的关键酶之一。XOD 主要分布于哺乳动物的心，肺，肝脏等组织中，当肝功能受损时， XOD 大量释放到血清中，对肝损害的诊断具有特异性的意义。 XOD 催化黄嘌呤产生尿酸，尿酸在 290nm 下有特征吸收峰。
需自备的仪器和用品： 紫外分光光度计、台式离心机、可调式移液器、1mL 石英比色皿、研钵、冰和蒸馏水。
 
操作步骤：
 一．粗酶液提取： 
1、 细菌、细胞或组织样品的制备： 
细菌或培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量（104 个）： 提取液体积（mL）为 500~1000：1 的比例（建议 500 万细菌或细胞加入 1mL 提取液），超声波破 碎细菌或细胞（冰浴，功率 20％或 200W，超声 3s，间隔 10s，重复 30 次）；8000g4℃离心 10min， 取上清，置冰上待测。 
组织：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织，加入 1mL 提取液），进行冰浴匀浆。8000g4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。或者直接用 0.5mg/mL 的酶液直接测定，为保证实验准确性建议用提取液梯度稀释后测定。 
2、 血清（浆）样品：直接检测。 
 
二．操作步骤： 
1、 分光光度计预热 30min 以上，调节波长至 290nm，蒸馏水调零。 
2、 XOD 检测工作液的配制：用时在每瓶试剂二中加入 15mL 试剂一，充分混匀，待用；用不完的 试剂 4℃可保存一周。 
3、 测定前按需取出一定量的 XOD 检测工作液 37℃(哺乳动物)或 25℃（其它物种）水浴 30min 以上。 
4、 对照管：取 1mLXOD 检测工作液于 1mL 石英比色皿中，再加入 35μL 蒸馏水，混匀，室温下立 即测定 290nm 下的初始吸光值 A1 和 1min 后的吸光值 A2，计算ΔA 对照＝
5、 测定管：取 1mLXOD 检测工作液于 1mL 石英比色皿中，再加入 35μL 样本，混匀，室温下立即 测定 290nm 下的初始吸光值 A1 和 1min 后的吸光值 A2，计算ΔA 测定＝A2-A1。 
 
三．XOD 活性计算： 
1、血清（浆）XOD 计算： 
单位的定义：每毫升血清（浆）每分钟催化产生 1μmol 尿酸定义为一个酶活力单位。 
XOD（μmol/min/mL）＝[(ΔA 测定-ΔA 对照)×V 反总÷（ε×d）×106]÷V 样÷T=2.424×ΔA 
2、组织、细菌或细胞中 XOD 计算： 
（1）按样本蛋白浓度计算：
单位的定义：每 mg 组织蛋白每分钟催化产生 1μmol 尿酸定义为一个酶活力单位。 
XOD（μmol/min/mgprot）=[(ΔA 测定-ΔA 对照)×V 反总÷（ε×d）×106]÷(V 样×Cpr)÷T=2.424×ΔA÷Cpr 
（2）按样本鲜重计算： 
单位的定义：每 g 组织每分钟催化产生 1μmol 尿酸定义为一个酶活力单位。 
XOD（μmol/min/g 鲜重） =[(ΔA 测定-ΔA 对照)×V 反总÷（ε×d） ×106]÷（W×V 样÷V 样总） ÷T=2.424×ΔA÷W 
（3）按细菌或细胞数量计算： 
单位的定义：每一万个细菌或细胞每分钟催化产生 1μmol 尿酸定义为一个酶活力单位。 XOD（μmol/min/104 cell）=[(ΔA 测定-ΔA 对照)×V 反总÷（ε×d）×106]÷（500×V 样÷V 样总） ÷T=4.848×10-3×ΔA 
V 反总：反应体系总体积，1.035×10-3 L；ε：尿酸摩尔消光系数，1.22×104 L/mol/cm；d：比色 皿光径，1cm；V 样：加入样本体积，0.035mL；V 样总：加入提取液体积，1mL；T：反应时间， 1min；W：样本质量，g；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；500：细胞或细菌总数，500 万。
 
注意：
 1、正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定，保证吸光值变化在 0.01～0.9 之间。 
2、试剂二加入试剂一后会有部分小颗粒，可以直接使用或者离心后使用，对实验结果基本无影响。