采用瞬时转染的方法能够方便快捷地对miRNAs功能进行研究与分析,而且由于小分子的转染效率较高,对于gain-of-function的研究十分有效,对于较长时间才能出现的表型则需要反复转染miRNAs
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直接的证据在于Sensor reporter的构建与活性检测,莱德尔的技术人员利用Promega特有psiCHECK质粒,对miRNAs与靶基因3’UTR的关系作出准确判断。
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免疫组化是利用抗原和抗体特异性结合原理,通过化学反应使标记抗体的显色剂 (酶、荧光素和金属离子等)显色或发光来检测组织细胞内抗原(多肽和蛋白质),对其进行定定性及定量的原位检测。
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TUNEL(TdT-mediated dUTP nick end labeling)细胞凋亡检测试剂盒是用来检测组织细胞在凋亡早期过程中细胞核DNA的断裂情况。
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基因的功能研究即通过过表达该基因和抑制内源基因的表达的手段来研究某个基因的生物学功能。常规转染技术可分为两大类,一类是瞬时转染,一类是稳定转染(永久转染)。
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LNA作为一种新的反义核酸,具有与DNA/RNA强大的杂交亲和力、反义活性、抗核酸酶能力、水溶性好及体内无毒性等优点。LNA可用于miRNAs原位杂交以及的内源分子的反义封闭,是研究miRNA功能手段
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莱德尔技术使用的是以下两种方式:● pri-miRNA(含侧翼序列)的表达形式,Ⅱ型启动子载体;● pre-miRNA的表达形式,U6启动子载体。
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单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphism,SNP),主要是指在基因组水平上由单个核苷酸的变异所引起的DNA序列多态性,它是人类可遗传的变异中最常见的一种。
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服务流程:1、杀伤曲线绘制; 2、转染质粒,铺板,用不同抗生素浓度筛选细胞单克隆; 3、qPCR和WB检测稳定克隆的外源基因表达水平。
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