使用CESI-MS技术分离检测单克隆抗体的蛋白亚型以及抗体的纯度
CE和MS分别是单克隆抗体的电荷异质性、纯度以及分子量表征的重要方法。而将CE与MS结合起来,我们就可以将单克隆抗体的电荷异质性、纯度以及分子量等几种表征结合到一次分析中来完成。此外,高分辨的质谱检测技术可以帮助我们鉴定未知的CE峰。相对于光学检测,也可以获得更为准确的纯度信息和分子量信息。
样品制备:在CESI-MS技术的实验中,IgG1,IgG2以及IgG4的溶液(浓度为20 mg/mL)使用脱盐柱(Thermo Fisher Scientific)脱盐,然后溶解在50mM(pH 4)的醋酸铵溶液中。IgG的还原是向IgG的溶液中加入10 mM的 二硫苏糖醇和0.1%的Rapigest SF表面活性剂(Waters),然后在60 ℃下恒温45分钟。加入0.5 %的甲酸,37 ℃恒温10分钟,将Rapigest切断,随后加入沉淀剂将Rapigest去除。然后向溶液中加入高浓度(2 M,pH 4)的醋酸铵使其终浓度为50 mM。单独使用CE时,IgG分子被溶解在两性电解质的溶液中(cIEF)或者SDS的凝胶溶液中(CE-SDS)。在SDS凝胶溶液中的还原反应是在60 ℃下进行的,加入10 mM二硫苏糖醇,恒温10分钟。
CESI 8000与质谱联用时的条件:CESI的实验使用的仪器是SCIEX CESI 8000 Plus系统。该系统具有控温的自动进样系统,最大电压为30 kV的高压系统。使用的毛细管是中性涂层毛细管,毛细管的尖端经过腐蚀形成一个电喷雾的喷口。分离过程中的缓冲溶液和导电溶液是3%的醋酸。进样压力为5 psi,进样时间为10 s,进入毛细管的样品体积约为7.5 nL。由于样品是溶解在50 mM的醋酸铵中,因此在进样之后会有一个瞬态的等速电泳过程将样品进行堆积。预分离过程中,分离条件为:电压30 kV,压力2psi,分离时间为7 min。然后将压力增大到10 psi分离10 min,并进行电喷雾。
结果与讨论
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