细胞铺板不均匀？3招铺遍天下板子无敌手！
为什么把细胞铺均匀就那么的难?什么米字法、十字法、螺旋法、还有摇板子要拿起来摇、 或者一定要放在台子上磨（那种板子与台子摩擦出来尖锐的声音...... 最后放进孵箱之前,还生怕几步路摇坏了才铺好的板子........）五花八门.
不过大多数技巧其实并没有太大的用处，本文总结最实用的细胞铺板的3种手法技巧，有了这些手法，细胞铺均匀不是事儿！
首先，细胞铺板不均匀分为三种情况：
1.中间多，周围少
2.中间少，四周多
3.一坨一坨成块
到底该怎么拯救呢？
手法一：均匀单层
要铺成那种很均匀的单层细胞，手法如下：
1.细胞板子先加入一定量(一般是总量培养基的1/5)的培养基，放入孵箱中放置10-20min。
2.在滴入细胞时，细胞板子与通风橱有一定的角度，沿着板壁的孔边缘滴入。
3.滴入后，呈“8”字方法摇晃5-8次。
4.置于水平台上，放置10-20分钟
5.放入孵箱。
在细胞铺板时，每一种板子的孔面积有多大，培养的液体量以及加入细胞量参考下图.
手法二：中间少，周围多
其实细胞铺板不一定都需要单个单个的那么均匀，比如，做免疫荧光时可以铺中间少，周围稍多的板子，同时检测到单个细胞的形态，另外又可以照一点低倍的用作于统计，所有的细胞都在一个环境中。
特别说明一下：这里的多也只是相对于多，细胞也是单层的。
中间
四周
要铺这样的细胞样子，那铺细胞时要注意手法了：
1.细胞板子不需要提前用培养基润洗，直接从边上滴入混有细胞的培养基。
2.放置30s-1min后，前后摇晃5-8次。
3.放在水平台上静置2-5min。
4.放入孵箱。
手法三：中间多，周围少
一般在提取蛋白或者提取RNA的时候有时会这样铺板，因为有些细胞刮刀不好用，没有办法刮到周围的，想要铺中间多，周围少的板子，手法如下：
1.细胞板子不需要提前润洗，从中间滴入进去后。
2.把板子朝一个方向顺时针或者逆时针旋转3-5圈。
3.水平台上静置2-5min。
4.放入孵箱。
想要细胞铺板铺得好，背景知识很重要。在铺细胞的时候，需要准确的知道所养细胞的特性，比如：
1.细胞的名称，来源。
2.细胞的属性。
3.细胞分裂时间。
最主要的是要搞清楚细胞的生长曲线，推断铺板后多久可以到达什么细胞密度。
细胞铺板后，细胞状态不好怎么办？
建议从以下几个方面考虑一下原因：
1.用来铺板的细胞状态本身就不好。
2.用来铺板的细胞传代次数太多，有些老化。
3.胰酶消化时间过长。
4.中和的血清量及时间不够。
5.支原体污染。
细胞铺板是一个经验积累的过程，手法也需要积极的改进，不要生搬硬套，也不要一味追求绝对的铺均匀，在实验过程中多思考细胞本身的特征和属性，出现问题积极解决。