描述
Pierce BCA 蛋白定量试剂盒是一种双组分、高精度、兼容去垢剂的蛋白定量试剂，可准确测定蛋白浓度。对于蛋白研究中的常见样品类型，Pierce BCA 试剂均可准确测定蛋白浓度。Pierce BCA 试剂可用于评估全细胞裂解物、亲和柱分离组分和蛋白样品纯化的产量，还可在工业应用中用于蛋白污染的监测。与大多数染料结合法相比，BCA蛋白定量法受蛋白质氨基酸组成差异的影响更小，因此有更高的蛋白间定量一致性。
BCA 蛋白定量试剂盒的特点包括：
•比色法测量—可以目测评估，也可使用标准分光光度计或酶标仪 (562 nm) 进行测量
• 高度一致性—与染料结合法 (Bradford) 相比，BCA定量法的蛋白间差异更小
• 兼容性强—在大多数离子型和非离子型去污剂的常见浓度下，性能不受影响
• 定量时间—30 分钟孵育；与传统 Lowry 法相比，操作更简单，且检测速度快 4 倍
• 检测范围—BSA 的线性工作范围为 20 至 2000 µg/mL
• 高灵敏度—使用增强方案，可检测浓度低至 5 µg/mL 的样品
测定工作原理
BCA 蛋白测定法是在碱性环境下，通过蛋白将 Cu2+ 还原为 Cu1+ ，再通过二辛可宁酸 (BCA) 来检测亚铜阳离子 (Cu1+) 。第一步是铜与碱性环境中的蛋白质螯合，形成浅蓝色复合物，这一过程被称为双缩脲反应。在该反应（双缩脲反应）中，由三个或更多氨基酸残基的肽在含酒石酸钠钾的碱性环境中与铜离子形成有色螯合复合物。
在显色反应的第二步中，BCA 与第一步形成的还原型（亚铜）阳离子发生反应。两分子 BCA 与一个亚铜离子螯合，产生深紫色反应产物。BCA/铜复合物是水溶性的，在 562 nm 处具有强线性吸收，且吸收度随蛋白质浓度增加而升高。该复合物的灵敏度（检测下限）大约是第一个反应中淡蓝色的 100 倍。
反应很大程度上受到蛋白氨基酸序列中四个氨基酸残基（半胱氨酸、胱氨酸、酪氨酸和色氨酸）的影响。然而，不同于考马斯染料结合法，肽链也有助于颜色形成，因此可将不同蛋白间的测量差异降至最低