如何选择合适的DNA聚合酶？

聚合酶链式反应(PCR)是分子生物学研究的核心技术，每位生物科研工作者对其都不陌生。PCR技术的核心成份是DNA聚合酶，它是PCR反应成败的一个关键因素。目前市场上的DNA聚合酶种类繁多，常见的有：Taq，Canace，Pfu，KOD，Phusion，Primerstar，Tth等，面对众多选择，对于不了解各种DNA聚合酶特性的科研菜鸟来说，都不知该如何下手。

在选择之前，先了解一下DNA聚合酶的四个重要特点：热稳定性，保真度，扩增速度及特异性。

l   热稳定性

热稳定性是指DNA聚合酶能够耐受高温的能力。不同的DNA聚合酶的热稳定性差异较大，一般通过半衰期来体现。

l   保真度

保真度是指DNA聚合酶精确复制DNA模板的能力。部分DNA聚合酶具有3’-5’的核酸外切酶活性，能够校正错误碱基。保真度的高低可通过错配率来体现。

l   扩增速度

扩增速度是指在延伸时，DNA聚合酶向DNA新链中掺入核苷酸的速率。扩增速度除与DNA聚合酶有关，还会受到延伸温度，缓冲液及模板复杂程度等的影响。

l   特异性

特异性是指DNA聚合酶在PCR过程中只扩增目的片段的能力。为了提高PCR特异性，常通过抗体法或配体法等方式对DNA聚合酶进行修饰，使酶活性在低温条件下封闭，减少非特异性延伸和扩增。

接下来，小编介绍几种常用的DNA聚合酶及其应用，您可根据实验目的不同，选择合适的DNA聚合酶。

1）Taq DNA聚合酶（应用：常规PCR。）

Taq DNA聚合酶来源于Thermus aquaticus，热稳定性高，在PCR循环高温条件下仍可保持较高的酶活。Taq DNA聚合酶具有良好的行进性，扩增效率高，扩增速度为30-60 sec/kb。但该酶无3’→5’核酸外切酶活性，即无校正功能，易产生错配碱基。使用该酶扩增得到的PCR产物3’末端带A，可直接用于TA克隆。

2）高保真DNA聚合酶（应用：高保真PCR，如基因克隆、点突变、测序及SNP分析等。）

高保真DNA聚合酶是一类具有3’→5’核酸外切酶活性的酶，具有校正功能，扩增产物为平末端。当实验对保真度要求较高时，需选择此类酶。常见的高保真酶有Pfu、KOD、Phusion、Canace等。不同的高保真酶在保真度，扩增速度，扩增效率等方面有所差异。一代的高保真酶的保真度较低，扩增速度较慢，如Pfu，KOD等。

翊圣生物推出了Canace高保真DNA聚合酶。该酶是基于Pfu DNA聚合酶改造而成的新一代高保真DNA聚合酶。该酶的保真性，扩增速度，扩增长度等都有了很大提升。其保真性是Taq酶的52倍，Pfu酶的6倍，延伸速度可达15 sec/kb，可扩增20 kb的长片段，非常适合高保真PCR。Canace酶具有极高的性价比和广泛的模板适应性，已经成为市场上热门的新产品。

3）热启动DNA聚合酶（应用：低拷贝基因扩增。）

热启动DNA聚合酶是一类提高PCR产物特异性的酶。该类酶是通过抗体法或配体法等方式对DNA聚合酶进行修饰而成，使得DNA聚合酶活性在预变性温度下才被激活。

翊圣生物根据对DNA聚合酶修饰方式的不同，将热启动酶分为两类：一类是配体法修饰的热启动酶，如Hieff^TM Hot Start DNA Polymerase，预变性95℃，2-3 min释放酶活；另一类是抗体法修饰的热启动酶，如UNICON™ Hot Start Taq DNA Polymerase，50℃，30 min条件下仍然可以完全封闭活性。预变性95℃，30 sec即可释放酶活。使用该类酶扩增得到的PCR产物3’末端带A，可直接用于TA克隆。

4）Taq Plus DNA聚合酶（ 应用：快速、常规PCR。）

Taq Plus DNA聚合酶是由Taq DNA聚合酶和具有3’→5’核酸外切酶活性的高保真DNA聚合酶按比例混合而成，具有扩增效率高和错配率低的优良性能，其扩增速度为30 sec/kb，错配率是Taq DNA聚合酶的1/6。使用该酶扩增得到的PCR产物3’末端带A，可直接用于TA克隆。

5）Long Taq DNA聚合酶（应用：长片段PCR。）

Long Taq DNA聚合酶也是Taq 酶与高保真酶按比例混合而成的酶，配上优化的缓冲体系可使得该酶可扩增长达8 kb的人基因组DNA片段和10 kb的质粒模板。其PCR产物3’末端带A，可直接用于TA克隆。

6）直接扩增DNA聚合酶（应用：转基因型鉴定，基因分型）

直接扩增DNA聚合酶是指可以直接以样本裂解产物或未纯化的基因组DNA为模板进行扩增的酶。该类酶具有很强的PCR反应抑制物耐受性。

翊圣生物针对不同样本，通过对Taq DNA聚合酶改造，并配上优化的缓冲体系，开发出四款直接扩增DNA聚合酶。分别是用于动物组织的Animal Tissue Direct PCR Kit，特别针对小鼠组织的Mouse Tissue Direct PCR Kit，用于全血的Animal Blood Direct PCR Kit以及植物组织的Plant Tissue PCR Kit。这四款产品均可直接对样本裂解液扩增，操作方便，减少了样本用量、实验成本和时间等。

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