核酸释放剂,可直接pcr,适用于大多数临床样本!

  • 来源:生物谷
  • 时间: 2021/1/5
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    NF-2可直接裂解释放样品核酸(DNA/RNA),无需核酸抽提,直接取混合液上清作为模板进行核酸PCR扩增或恒温扩增,且缓冲液对核酸扩增的酶有特异性保护。

    NF-2适用于所有临床样品(唾液、新鲜全血、血清、肺泡冲洗液、尿液、组织、环境)中细胞(真核、昆虫等)和病原体(病毒、支原体、衣原体、细菌等)采集后的高效灭活,含病原体的液体样品加入缓冲液后5min即可灭活裂解病原体,并高效释放出核酸。

    混合液无需再抽提核酸,可直接取上清作为模板进行PCR或者恒温扩增检测。NF-2对核酸扩增酶(Taq酶、反转录酶、Bst酶、RPA酶等)无任何抑制,不影响扩增效率。


     释放步骤

    1 血清、唾液、尿液、拭子采集液、细胞培养液等液体样本

    (1) 取NF-2 150μL置于1.5mL离心管内,再取液体待检样本50μL,充分反复吹打混匀2-5次,室温(22~25℃)垂直放置静止≥2min即可。

    (2) 如果是新鲜全血,则取10μL全血,加入100μL NF-2液中,充分反复吹打混匀2-5次,室温(22~25℃)垂直放置静止≥2min即可。

    注意:完全溶血的全血不适用本方法,必须进行核酸抽提方可进行检测。

    2 组织固体样本

    取NF-2 300μL置于1.5mL离心管内,再取黄豆至花生粒大小的组织样品加入缓冲液中,用剪刀充分剪碎,充分反复吹打混匀3-5次,室温(22~25℃)垂直放置静止作用≥5min。5min后,取混合液上清2.5μL作为核酸扩增模板,进行实时荧光或常规PCR扩增,或者恒温扩增(LAMP、RPA、RCA等)。

    注意:亦可加入蒸馏水或生理盐水组织匀浆后取上清液,按照液体样本进行操作。 

    扩增步骤

    直接取混合液上清2.5μL作为核酸扩增模板,进行实时荧光或常规PCR扩增,或者恒温扩增(LAMP、RPA、RCA等)。注意:模板的体积应≤核酸反应总体积的10%。即25μL的反应体系加入的混合上清不超过2.5μL,50μL的反应体系加入的混合上清不超过5μL。


    注意事项

    1.病原体免抽提直扩不但与样品前处理液有关,还与PCR反应液的配方密切相关。直扩法的PCR反应液中多加入了较常规PCR反应液较高的KCl浓度中,以增加直扩的可能性。

    2.严禁饮用、触摸接触NF-2,会对皮肤造成伤害。

    3.为保证生物安全,待检样本加入采样管后必须等待5min,待病原体彻底灭活后方可开盖进行检测。

    4.采集标本须新鲜,及时检测,以提高检测率和检测敏感性。 


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