菁准防控 | COVID-19 RNA质控品对新冠病毒核酸检测试剂盒的性能比较

在北京刚刚控制好疫情，病例快速清零后，香港和新疆近日又连续出现新发病例，基于我国强大的防控体系，我们相信这次疫情也会得到快速控制。

核酸检测是精准防控的有效手段，然而近日仍有报道来华参加CBA的广东外援马尚起飞前检测结果正常，抵深后被确诊为无症状感染者而无缘总决赛，这也表明核酸检测准确率仍然有待提高。

菁良使用自主研发的COVID-19 RNA质控品（GW-CRPM002）作为阳性参考品，对目前市场上6款主流荧光PCR法试剂盒进行了平行检测，并对相关试剂盒的性能进行了比较和分析。以下是我们这次更新的一些应用数据分享。

方法

将菁良基因COVID-19 RNA质控品配制配置成6个梯度浓度的弱阳性参考品，根据各试剂盒的说明书进行操作及上样，比较试剂盒的检测结果（6家试剂盒分别以A、B、C、D、E、F表示）。

//步骤

√计算配制参数：根据6款试剂盒要求的上样体积、每种浓度做3个重复，计算得到每个浓度质控品至少需求体积为214.5μL。根据此原则对样品进行稀释和配制。

√离心：取一管干粉状态的COVID-19 RNA质控品，进行离心操作（1000rpm，30s），防止开盖损失。

√复溶：加入150μL DEPC水（Thermo Scientific，cat. R0603）将干粉溶解，涡旋振荡20s，短暂离心，得到终浓度为约10000copies/ml的“COVID-19 RNA质控品母液“。（水的体积根据产品说明附件（《数字PCR实测值》）提供的病毒基因拷贝数均值进行参考计算）

√稀释：使用DEPC水稀释到终浓度为100copies/ml, 250copies/ml, 500copies/ml, 1000copies/ml, 2000copies/ml, 3000copies/ml等6个浓度梯度、体积≥214.5μL的溶液.
本实验采用梯度稀释的方法进行稀释：
■ 取10000copies/mL溶液65μL，加入DEPC处理水151.7μL，混匀得3000copies/mL溶液216.7μL。
■ 取10000copies/mL溶液85μL，加入DEPC处理水340μL，混匀得2000copies/mL溶液425μL。
■ 取2000copies/mL溶液205μL，加入DEPC处理水205μL，混匀得1000copies/mL溶液410μL。
■ 取1000copies/mL溶液190μL，加入DEPC处理水190μL，混匀得500copies/mL溶液380μL。
■ 取500copies/mL溶液160μL，加入DEPC处理水160μL，混匀得250copies/mL溶液320μL。
■ 取250copies/mL溶液88μL，加入DEPC处理水132μL，混匀得100copies/mL溶液220μL。

√上样检测：按各试剂盒说明书所需反应液体积，依次加入上述制备的质控品溶液于反应体系中，使用荧光定量PCR仪（CFX Connect Real-Time PCR Detection System，Bio-rad）对COVID-19 RNA质控品进行检测，每个反应进行三次重复。

结果与分析
将三次重复实验的数据取均值，6款试剂盒在不同浓度梯度下的检测结果如下所示：

图1 //不同样品浓度在6款试剂盒的检测结果

 

图注：横坐标表示不同的试剂盒，纵坐标为检测的溶液浓度；圆点颜色表示检测结果：黄色表示检出，红色表示未检出；橙色虚线代表试剂盒的检测限

图2 //不同样品浓度在6款核酸检测试剂盒的阳性检出率

■ 当样品检测浓度为3000 copies/ml、 2000 copies/ml、1000 copies/ml时，6款试剂盒阳性检出率为100%

■ 当样品浓度在500copies/ml时，除了C试剂盒，其他5款试剂盒均能检出，阳性检测率为83%

■ 当样品浓度在250copies/ml时，只有A、E、F这3家试剂盒检出，阳性检测率为50%

■ 当样品浓度在100 copies/ml时，只有F试剂盒能检出，阳性检测率仅为17%


结论

■ 随着样本浓度的下降，6款试剂盒的阳性检出率也呈下降的趋势，对不同浓度的弱阳性样本的检出体现了各试剂盒检测性能的差异，并且随着样本浓度的下降，阳性检出率也呈下降的趋势。

■ 虽然6款试剂盒在各自的检测限范围内均能100%检出弱阳性样本，符合承诺的检测限检测能力，但在相同检测限的条件下，部分试剂盒在检测限以下的多个梯度浓度中也能有效检出，体现了更优的检测性能。


在以上测试中，菁良COVID-19 RNA质控品通过简单的稀释步骤，即可得到不同梯度浓度的弱阳性参考品，为试剂盒的性能验证及平行比较提供了可能和保障。

该产品覆盖病毒基因组全长，理论上可适配目前所有核酸检测试剂盒，是进行各种试剂盒性能比较的理想参考品。

该产品为RNA干粉形式，稳定性好、保质期长，相对溶液的形式更易于保存和运输。含人源RNA背景，能更好的模拟临床样本，通过ddPCR精确验证的病毒拷贝数，用户可以根据自身的使用需求稀释至任意浓度。

该产品可作为不同试剂盒的弱阳性参考品/质控品，应用于检测试剂盒的性能验证和平行比较，也可作为日常质控品，应用于日常检测的全流程监控和结果检验。

 

 

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