有问有答| 一起探讨基因合成、引物测序相关问题(分子讲座完结篇)

来源: 武汉金开瑞生物工程有限公司   2020-7-13   访问量:457评论(0)

上期讲座Q&A


1、 我想问下:为什么引物不能退火之后跑胶验证纯度呢?
两条引物退火成功率达不到百分之百,里面会存在单链引物,引物退火后跑胶有杂链很正常,不能以此来判断单链引物纯度。

2、老师您好,我想自己设计测序引物,请问对于测序引物有什么要求吗?
在待测目的基因前面100bp左右设计引物,GC含量不能太高或太低,3’端不能有错配,引物的长度建议是18-20bp以内。

3、甲基化的建议反向测序,是什么意思?
正向测序有甲基化的结构,会导致测序峰图双峰或者严重的时候导致信号突然中断,就可以反向测序,然后正反双向测序结果拼接起来就可以得到完整的序列。

4、老师请问一个测序反应有效的大概有多长?
普通序列一个测序反应有效长度大概是800bp左右。

5、RNA能合多少呢
30bp以内。

6、稀释后引物保存时间多久?
稀释后的引物一般4℃保存3个月内是没有问题的

7、你们的积分的兑换时间有限制吗?
积分不清零的

8、测序为什么前70bp不准呢
一代测序,由于仪器的缺陷,所以前面会有几十bp是不准确的,严重的时候会有70bp左右不准确。

9、引物最长能合多长呢?
引物最长能合139bp。

10、金开瑞引物合成与外面其他公司引物合成相比,优势有哪些?
我们公司技术服务内容比较多,内部和外部引物合成需求都是一起合成,效果和质量的反馈方面,我们综合有内部使用和外部使用反馈,更全面。

11、只做常规的pcr,用什么纯化方式的引物呢?
常规的pcr脱盐纯化就可以满足实验了。

12、引物测序时,单向、双向、测通之间的具体区别是什么呀?
这个主要是根据待测目的序列的长度来决定的,如果待测目的序列700bp以内的话可以选择正向或者反向都行;1500bp以内的序列一般双向测序就可以了;如果是待测目的序列大于1500bp就可以填测通,这边会根据测序结果自动安排测序反应,直到完全测通,我们会默认测通后拼接。

13、不同纯化方法,你们收费不一样是吗
不一样的,脱盐纯化

14、金开瑞收到测序样品后一般最快多久出结果?
质粒和PCR产物24小时内出结果,菌液48小时内出结果。

15、讲座回放和PPT怎么获取?
讲座PPT获取方式:金开瑞微信公众号回复引物测序
讲座回放,扫码即可观看


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