Cell、Nature、Science等期刊多次出现这家公司的新冠病毒蛋白

来源: 北京义翘神州科技有限公司   2020-5-29   访问量:1694评论(0)

COVID-19疫情已经爆发多月,全球人民的生活和生命都受到了极大的影响。经过多个月的研究,科学家们已经对新冠病毒有了比较系统的认识。新冠病毒主要靶点蛋白结构、结合受体以及中和抗体、疫苗等各方面都取得了很多突破性的研究进展。

SARS-COV-2的基因组大小为30kb,共编码29种不同的蛋白质,包括蛋白酶、RNA依赖性RNA聚合酶(RdRp)、结构蛋白等。SARS-COV-2病毒体由结合到RNA基因组的核衣壳蛋白(N)、包膜(由ME蛋白组成)及棘突蛋白(S,三聚体)构成。S蛋白由S1S2两个亚基组成。S1蛋白含有受体结合域结构(RBD),能够与血管紧张素转换酶2ACE2)结合,结合后,S蛋白被宿主膜丝氨酸蛋白酶TMPRSS2裂解,促进病毒进入宿主细胞。

义翘神州在122日就全球首发上市新冠病毒重要靶点蛋白S-RBD,随后又研发出新冠病毒的S1SN等一系列重组蛋白。近期还根据相关研究报道,陆续上线了新冠病毒RBD变异蛋白,包括V367FF342LA345SK458RV383AN354D等。

那么义翘神州表达的这些重组蛋白质量怎么样呢?接下来我们将会通过一系列的文章解读来回答这个问题。用实力说话。

1. Science重磅:西湖大学首次成功解析ACE2全长结构

文章首次公开了新型冠状病毒S蛋白受体结合结构域RBD与细胞表面受体ACE2全长蛋白复合物的三维结构,展示了新冠病毒侵染人体细胞的详细过程。通过RBDACE2的相互作用示意图,可以看出新冠病毒与SARS相似,S蛋白的RBD像一座桥一样横跨在ACE2蛋白表面,与ACE2紧密结合,这就是新冠病毒在人体内可以长驱直入的关键原因。


在这篇文章中,关于RBD-ACE2-B0AT1复合物的介绍时,写到:

To gain insight into the interaction between ACE2 and the SARS-CoV-2, we purchased 0.2 mg recombinantly expressed and purified RBD-mFc of the SARS-CoV-2 (for simplicity, we will refer it as RBD) from Sino Biological Inc., mixed it with our purified ACE2-B0AT1 complex at a stoichiometric ratio of ~ 1.1 to 1, and proceeded with cryo-grid preparation and im-aging. Finally, a 3D EM reconstruction of the ternary complex was obtained.

研究人员为了深入了解ACE2和新冠病毒之间的相互作用,将从义翘神州购买的0.2mg新冠病毒重组表达和纯化的RBD-mFc,与实验室纯化获得的ACE2-B0AT1复合物,以1.1:1的化学计量混合,然后进行低温处理。最终获得RBD-ACE2-B0AT1三元复合物的3D EM结构。

2. Nature:利用hACE2转基因小鼠揭示SARS-CoV-2的致病性

ACE2是新冠病毒进入细胞的受体,来自中国医学科学院的秦川团队也以最快的速度构建了人ACE2转基因小鼠模型,用来研究病毒的致病性。研究发现感染新冠病毒的hACE2小鼠体重下降,病毒在肺中复制,而在野生型小鼠中未观察到相关现象,证明了新冠病毒在hACE2小鼠中的致病性。

研究人员通过ELISA确定hACE2转基因小鼠与野生型小鼠中新冠病毒的特异性IgG96孔板包被新冠病毒的S1蛋白(96-well plates were coated with Spike 1 protein of

SARS-CoV-2 (0.1 μg/100 μL, Sino Biological, 40591-V08H))。结果在转基因小鼠的血清中,21dpi检测到靶向新冠病毒S蛋白的特异性IgG抗体。


研究人员为了进一步验证小鼠模型在药物研发和疫苗开发等方面的应用,在实验室构建了抗新冠病毒Spike 1蛋白的抗体。

Mice were immunized with purified SARS-CoV-2 S1 protein (Sino bio-logical) and splenocytes of hyper immunized mice were fused with myeloma cells. Positive clones were selected by ELISA using SARS-CoV-2 S1 protein (Extended Data Figure 5). The cell supernatant of 7D2 clone, binding to SARS-CoV-2 S1 protein, was collected for immunofluores-cence analysis.

利用购自义翘神州的SARS-COV-2 S1蛋白免疫小鼠,然后将高度免疫的小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞融合。使用包被SARS-CoV-2 S1蛋白的ELISA试剂盒筛选阳性克隆。收集与S1蛋白结合的7D2克隆细胞上清液用于免疫荧光分析。结果发现hACE2转基因小鼠中新冠病毒S蛋白与hACE2蛋白在肺泡上皮细胞中存在共定位,而对照组无此现象。说明新冠病毒进入细胞需要ACE2受体。


3. Nature:从“非典”患者康复者中获得新冠病毒中和抗体

本研究从感染SARS患者的记忆B细胞中鉴定出靶向SARS-COV-2 S蛋白的多个单克隆抗体。记忆B细胞是在患上感染性疾病后形成的,可以持久存在,甚至永久存在。在本次研究中获得25种具有SARS-COV-2交叉反应性的抗体,其中有8株可以与脱毒和感染的细胞结合。

为了测定抗体对新冠病毒和SARSRBD蛋白的亲和力,研究人员利用Octet技术检测了S309S303S304S3154株抗体与RBD蛋白的相互作用。在实验中,选择购自义翘神州的SARS-CoV RBD-rabbitFcSARS-CoV-2 RBD-mouseFc蛋白,以1ug/ml的浓度关联15分钟。结果显示中和抗体以纳米甚至亚皮摩尔亲和力结合病毒的RBD蛋白。


4. Cell:从新冠病毒康复者体内筛选出高效中和抗体

研究人员从60COVID-19康复患者中筛选出14个具有强中和能力的单克隆抗体,其中BD-368-2中和假病毒的IC50值达到1.2ng/mL,中和SARS-CoV-2活病毒的IC50值为15ng/mL。进一步,该抗体在hACE2转基因小鼠中也展现出杰出的治疗和预防效果。


在这篇文章中,从抗原结合B细胞富集到单克隆抗体与RBD蛋白结合亲和力测定、与ACE2竞争力分析,再到利用Octet技术鉴定抗体结合的表位,一直利用义翘神州的生物素化S-RBD蛋白进行试验。


以上文章是新冠病毒入侵机制研究、中和抗体筛选、药物研发等方面具有代表性的突破研究。义翘神州作为一家生物试剂研发和生产公司,制备的新冠病毒蛋白能够为这些研究结果“添砖添瓦”,获得了客户的充分信任。正如总经理张杰博士所说:“为生物医学领域的科学家,尤其是从事传染病诊断与治疗的科研人员,提供高质量的试剂,以此推进全球公共健康事业的发展,一直以来都是义翘神州的责任与使命。”

最后,我们再来看看SARS-CoV-2 S-RBD蛋白的“质检报告”吧。

HEK293细胞表达,蛋白纯度>95%


蛋白与ACE2结合活性(Octet):亲和常数为0.56 nM


更多新冠病毒蛋白请查看(官网链接)

参考文献:

1. Sunney Xie, et al. Potent neutralizing antibodies against SARS-CoV-2 identified by high-throughput single-cell sequencing of convalescent patients’ B cells. Pre-proof

2. David Veesler, et al. Cross-neutralization of SARS-CoV-2 by a human monoclonal SARS-CoV antibody. Accelerated Article Preview

3. Chuan Qin, et al. The Pathogenicity of SARS-CoV-2 in hACE2 Transgenic Mice. Nature. 2020 May 7. doi: 10.1038/s41586-020-2312-y. Online ahead of print.

4. Qiang Zhou, et al. Structural Basis for the Recognition of SARS-CoV-2 by Full-Length Human ACE2. Science. 2020 Mar 27; 367(6485): 1444-1448.doi: 10.1126/science.abb2762. Epub 2020 Mar 4.



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