论细胞对转染实验的重要性-RFect转染试剂

来源: 常州百代生物科技有限公司   2019-11-29   访问量:572评论(0)

对于实验人员来说,充分了解转染体系的关键组分对细胞转染实验的效率有哪些影响,有助于转染实验的成功。

首先,密切观察您的细胞确保它们状态良好。在开始转染细胞之前,先制定一个适当的种板方案,使细胞密度从转染开始到结束都保持最佳状态。细胞是转染过程中的一个关键元素,细胞培养得好有助于提高转染成功率。对大多数转染操作而言,细胞都在转染当天或前一天种板。同样重要的是细胞在种板进行转染时不应处于生长过度的状态。RFect核酸转染试剂为例,一般是在做转染前一天接种/铺板,使做转染前细胞密度在30-50%;如果细胞是原代细胞,接种密度可以密一些;悬浮细胞可以在转染当天接种/铺板,待细胞状态稳定后做转染前细胞密度30-40%如果在转染时细胞过于密集,那么种到培养板上的就会是细胞团块而非单个细胞。

细胞间膜结构的差异可能是某些细胞类型天生难以转染的部分原因。所以,寻找更有效转染试剂的工作目前还主要是经验性的,尤其对于那些天生为悬浮的细胞而言更是如此。RFect有专为悬浮细胞核酸转染研发的试剂,可高效转染多种悬浮细胞,转染效率高达70%以上。

分批方案在对培养细胞进行分批传代培养之前,必须把贴壁细胞用胰蛋白酶消化使之脱离培养基质。这个常规操作可导致正常细胞功能受到严重损害。因此分批方案的不同如,胰蛋白酶消化时间的延长,胰蛋白酶的失活,以及消化后直到转染开始的时间都可能对转染实验有所影响。

对于某些细胞/试剂组合而言,浆膜状态被改变后有可能会影响到所用试剂和DNA的最佳配用量和配比。

某些细胞系相比较其他细胞系而言较不稳定,可能会随着培养时间的延长而改变,视不同的细胞系和培养条件而定。培养条件的不同可引起克隆选择。因此名称相同的同一细胞系有关其生理学和形态学以及转染能力性质可能会有很大的差异。

一般而言,细胞在冻存复苏后的一两代之内或直到它们完全复苏之前都很难转染。在不同细胞系之间转染效率的变化很大。某些细胞系在传代很大次后仍能保持稳定的转染效率,而其他一些则传代很少次数就表现出转染效率的差异。

营养物质的耗竭以及代谢废物的积聚会影响所有的细胞生长。细胞会因受到营养物质匮乏的压力而不适于转染。

报告基因的表达率与转染开始时的细胞数量和细胞健康以及它们随后直到细胞溶解之前的生长情况相关。

培养物污染培养物可被细菌、酵母、真菌、病毒、支原体、甚至其他细胞种类所污染。各种污染都会导致产生错误的结果。

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